糖皮質(zhì)激素和TGFβ1在人卵巢癌HO-8910細(xì)胞中協(xié)同上調(diào)PAI-1表達(dá)的機(jī)制研究.pdf

1、第一部分糖皮質(zhì)激素和TGFβ1在人卵巢癌HO-8910細(xì)胞中協(xié)同上調(diào)PAI-1表達(dá)的機(jī)制研究 糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid，GC)和轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factorβ1，TGFβ1)在它們各自的受體介導(dǎo)下，通過激活信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，調(diào)節(jié)基因的表達(dá)產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)。近年來已證明兩通路間存在復(fù)雜的相互作用，根據(jù)組織細(xì)胞類型的不同和調(diào)節(jié)基因的不同，表現(xiàn)為相互拮抗和協(xié)同效應(yīng)。本實驗室前期的工作

2、發(fā)現(xiàn)人工合成的糖皮質(zhì)激素-地塞米松(dexamethasone，Dex)和TGFβ1單獨或聯(lián)合處理，均能增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞系HO-8910與其細(xì)胞外基質(zhì)的粘附能力，且聯(lián)合作用大于單獨作用。纖溶酶原激活物抑制劑(Plasminogen activator inhibitor PAI-1)是纖溶酶原激活物的生理抑制劑；能通過抑制PAs對纖溶酶原的激活而抑制纖維蛋白和細(xì)胞外基質(zhì)降解，從而促進(jìn)基質(zhì)的沉積和細(xì)胞的粘附。已證明PAI-1是TGFβ1的內(nèi)

3、源性靶基因，TGFβ1能通過轉(zhuǎn)錄水平的作用誘導(dǎo)其表達(dá)，糖皮質(zhì)激素也能上調(diào)PAI-1的表達(dá)，二者有協(xié)同作用，但機(jī)制不很清楚。為了進(jìn)一步闡明Dex和TGFβ1通路間的相互作用和促進(jìn)細(xì)胞粘附的機(jī)制，本實驗以卵巢癌HO-8910細(xì)胞為模型，觀察了Dex和TGFβ1單用和合用對PAI-1表達(dá)的影響及其可能的機(jī)制。 我們的實驗首先證實了Dex和TGFβ1單用和聯(lián)用對HO-8910絀胞的PAI-1都有上淵作用，二者的聯(lián)合作用大于單用，并以早期

4、(2-4小時)的協(xié)同作用最為明顯，因此我們主要探討了Dex和TGF-β1早期協(xié)同上調(diào)PAI-1的機(jī)制。 我們首先柃測了Dex和TGFβ1單獨或聯(lián)合作用后PAI-1 mRNA的降解速率，證明Dex，TGFβ1單用和合用對PAI-1 mRNA的穩(wěn)定性都沒有明顯影響，表明Dex和TGFβ1協(xié)同作用發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平。進(jìn)一步實驗表明，糖皮質(zhì)激素受體(GR)的特異性抑制劑RU486不僅可以完全阻斷Dex的作用，也能明顯阻斷二者的協(xié)同作用，阻斷

5、后PAI-1 mRNA的水平約相當(dāng)于TGFβ1單獨作用的水平，表明協(xié)同作用是通過GR介導(dǎo)的，并提示在TGFβ1作用下，GC/GR的作用被增強(qiáng)。檢測了TGFβ1處理4小時對GC/GR報告基因MMTV-luc的活性，發(fā)現(xiàn)TGFβ1的確能增強(qiáng)GR的轉(zhuǎn)錄活性。接下來我們發(fā)現(xiàn)TGFβ1中和抗體對Dex和TGFβ1協(xié)同作用的阻斷率大于對TGFβ1單用的阻斷率，提示Dex也能增強(qiáng)TGFβ1信號通路的傳導(dǎo)。最后我們觀察了p38MAPK通路阻斷對Dex和

6、TGFβ1單獨以及合用時上調(diào)PAI-1表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)該通路阻斷不僅能部分阻斷TGFβ1的作用，還能明顯阻斷Dex和TGFβ1協(xié)同上調(diào)PAI-1 mRNA的作用。 小結(jié)：Dex和TGFβ1聯(lián)用可以在轉(zhuǎn)錄水平協(xié)同上調(diào)HO-8910細(xì)胞中PAI-1的表達(dá)，該作用通過GR介導(dǎo)。本實驗首次發(fā)現(xiàn)TGFβ1能增強(qiáng)GR的轉(zhuǎn)錄活性，并發(fā)現(xiàn)p38MAPK通路不僅參與了TGFβ1的作用，也參與了TGFβ1和Dex協(xié)同上調(diào)PAI-1的作用。實驗還證實

7、Dex也能增加TGFβ1上調(diào)PAI-1的作用。 第二部分低氧上調(diào)大鼠大腦皮質(zhì)中stomatin的表達(dá) Stomatin是一種膜上的脂筏蛋白，能與多種膜蛋白，如離子通道、轉(zhuǎn)運(yùn)子、骨架蛋白和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白等相互作用，并影響其功能。本實驗首次研究了低氰條件下大鼠大腦皮質(zhì)中stomatin的表達(dá)情況，以探討其在缺氧適應(yīng)中可能起的作用。 我們將大鼠放入8％O2、92％N2混合氣的低氧艙內(nèi)不同時間，用RT-realtime

8、PCR和Western blot方法檢測了大鼠大腦皮質(zhì)中stomatin mRNA和蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果顯示，低氧可使大鼠腦stomatin的mRNA和蛋白水平明顯增高，其中低氧12小時mRNA表達(dá)水平為對照大鼠的2.2倍，蛋白為對照的1.5倍。進(jìn)一步研究表明，去腎上腺后低氧仍能上調(diào)大鼠腦stomatin的表達(dá)，表明低氧上調(diào)大鼠腦皮質(zhì)中stomatin表達(dá)不依賴于腎上腺皮質(zhì)激素。實驗還發(fā)現(xiàn)去腎上腺能降低大鼠腦皮層中stomatin的水平

9、，給去腺大鼠補(bǔ)充人工合成的糖皮質(zhì)激素Dex，不能使stomatin的表達(dá)明顯上調(diào)；但去腺＋低氧＋Dex組stomatin的表達(dá)量明顯高于去腺＋低氧組，表明GC單獨對大鼠腦皮質(zhì)中stomatin的表達(dá)無明顯影響，但是能增強(qiáng)低氧對stomatin的誘導(dǎo)作用。 結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)低氧能上調(diào)大鼠腦stomatin的表達(dá)，該作用不依賴腎上腺皮質(zhì)激素；GC單獨對大鼠腦皮質(zhì)中stomatin的表達(dá)無明顯影響，但是能增強(qiáng)低氧對stomatin的誘