糖皮質(zhì)激素上調(diào)卵巢癌細(xì)胞中HIF--1α表達(dá)的機(jī)制及可能的生物學(xué)意義.pdf

1、研究目的:
　　卵巢癌是婦科致命的婦科惡性腫瘤，由于其發(fā)病隱匿，缺少特異可靠的篩查診斷指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)時(shí)往往已是晚期。轉(zhuǎn)移是卵巢癌患者死亡的主要原因。應(yīng)激與腫瘤的關(guān)系的研究越來越受到關(guān)注。應(yīng)激包括患者因患腫瘤引發(fā)的心理應(yīng)激被認(rèn)為能促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。糖皮質(zhì)激素(GC)是重要的應(yīng)激激素，具有強(qiáng)大的免疫抑制、抗炎和維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的作用，并能在其受體(GR)的介導(dǎo)下調(diào)節(jié)細(xì)胞的新陳代謝、分化、增殖及存活。此外GC還是臨床廣泛使用的藥物。除了治療自身

2、免疫性疾病和炎癥外，還被作為實(shí)體腫瘤/癌癥的化療或放療的輔助藥物，用來減少放化療的副反應(yīng)，增加患者的耐受性。盡管GC與腫瘤的關(guān)系的研究一直受到關(guān)注，但結(jié)果一直不明確。研究證實(shí)GC可抑制一些實(shí)體腫瘤的增殖和進(jìn)展，因此，有將GC單藥或者聯(lián)合細(xì)胞毒性藥物（如5氟尿嘧啶）治療乳腺癌和前列腺癌，并取得了一定的效果。反之近年來對多種腫瘤的研究表明，GC可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對放化療的抵抗，減少放化療誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞存活，而這些作用加上GC的免

3、疫抑制作用則有助于腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。因此GC對腫瘤的作用還不清楚，其作用是否因腫瘤的不同類型而異需要進(jìn)一步研究。
　　缺氧是腫瘤常見微環(huán)境特征之一，低氧可誘導(dǎo)低氧誘導(dǎo)因子HIF-1的表達(dá)。HIF-1是重要的轉(zhuǎn)錄因子，由HIF-1α和HIF-1β組成，其中α亞基為氧調(diào)節(jié)亞基。HIF-1α表達(dá)增加被認(rèn)為與臨床上腫瘤患者預(yù)后不良相關(guān)。研究表明卵巢痛組織中HIF-1α的表達(dá)明顯高于正常卵巢組織;并且HIF-1α在卵巢癌組織中的表達(dá)水平高與

4、卵巢癌患者的預(yù)后差呈正相關(guān)。近年來研究認(rèn)為HIF-1α的高表達(dá)促進(jìn)多種腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲，因此HIF1-α已經(jīng)成為幾種類型腫瘤進(jìn)展的關(guān)鍵預(yù)測因子。而HIF-1α對卵巢癌細(xì)胞侵襲和遷移的研究較少，現(xiàn)有的研究亦認(rèn)為缺氧下HIF-1α促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。
　　MUC1是一種跨膜黏蛋白，常過表達(dá)于一些上皮腫瘤，能夠與膜上的多種蛋白相互作用，激活細(xì)胞內(nèi)的PI-3K/AKT通路、Wnt通路等多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移等。

5、近年來，MUC1被當(dāng)作一種新的低氧誘導(dǎo)因子受到人們的關(guān)注，有報(bào)道MUC1與HIF-1α之間存在相互作用，但確切作用機(jī)制還不清楚。小G蛋白Rho激活的蛋白激酶ROCK2作為一個(gè)下游信號通路分子可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動，與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有國外學(xué)者在其研究中發(fā)現(xiàn)，Rho/ROCK途徑可以調(diào)節(jié)HIF-1α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。
　　我校病生教研室前期的研究發(fā)現(xiàn)GC在體內(nèi)和體外可以明顯促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移，并且GC可以上

6、調(diào)卵巢癌細(xì)胞中MUC1及ROCK2的表達(dá)。本課題在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討GC是否能影響卵巢癌細(xì)胞中HIF-1α信號通路進(jìn)而促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的遷移，并且探討其可能的機(jī)制，主要觀察了MUC1和ROCK2與GC增加HIF-1α蛋白進(jìn)而促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞遷移中的作用的關(guān)系。
　　研究方法:
　　我們在細(xì)胞水平進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以卵巢癌細(xì)胞系HO-8910、SKOV3為研究對象，實(shí)驗(yàn)過程中用含10％去激素血清的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，去除血清中的激素對

7、細(xì)胞的影響，用100nM DEX對細(xì)胞處理不同的時(shí)間。用Western Blot的方法檢測HIF-1α蛋白的表達(dá)水平。siRNA干擾實(shí)驗(yàn)分別對HIF-1α、MUC1的表達(dá)進(jìn)行干擾，繼而使用Western Blot的方法驗(yàn)證MUC1、ROCK2及HIF-1α的表達(dá)。利用Transwell小室檢測卵巢癌細(xì)胞的垂直遷移能力。
　　研究結(jié)果:
　　1.DEX可以明顯上調(diào)卵巢癌細(xì)胞中HIF-1α蛋白的表達(dá)，干擾HIF-1α的表達(dá)明顯阻

8、斷DEX促卵巢癌細(xì)胞遷移的作用。
　　2.DEX能上調(diào)卵巢癌細(xì)胞中MUC1的表達(dá)，干擾MUC1的表達(dá)不僅可以明顯阻斷DEX促卵巢癌細(xì)胞遷移的作用，也能明顯阻斷DEX上調(diào)HIF-1α的作用;反之干擾HIF-1α卻不影響DEX誘導(dǎo)MUC1表達(dá)的作用。
　　3.干擾HIF-1α并不影響DEX上調(diào)ROCK2的表達(dá)。
　　研究結(jié)論：
　　DEX能明顯增加卵巢癌細(xì)胞中HIF-1α蛋白的表達(dá)水平，該作用與Dex上調(diào)MUC1的表