芹菜素與TRAIL合用對HeLa細胞活性氧生成和凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　研究芹菜素(API)與腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)合用對人宮頸癌HeLa細胞凋亡影響,并探討其作用機制是否涉及促進活性氧生成。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)人宮頸癌HeLa細胞。全自動生化分析儀測定細胞培養(yǎng)液的乳酸脫氫酶(LDH)活性。臺盼藍拒染法檢測細胞死亡數(shù)。碘化丙啶(PI)染色流式細胞術(shù)(FCM)定量分析細胞凋亡率(亞二倍體 DNA含量細胞百分率)。ELISA法測定細胞Caspase-3活性

2、。DNA瓊脂糖凝膠電泳觀察細胞DNA梯形條帶。DCFH-DA熒光探針FCM檢測細胞活性氧。
　　結(jié)果：
　　通過測定細胞培養(yǎng)液乳酸脫氫酶的活性的細胞毒性實驗結(jié)果顯示, API和TRAIL以及兩者合用對人宮頸癌 HeLa細胞毒性的EC50值分別是104μmol/L、236ng/mL和23 ng/mL,藥物合并效應(yīng)的CI值是0.3186。臺盼藍拒染法的結(jié)果表明,API和TRAIL以及兩者合用誘導(dǎo)人宮頸癌HeLa細胞死亡的EC50

3、值分別是109μmol/L、163ng/mL和43ng/mL,藥物合并效應(yīng)的CI值為0.4562。碘化丙啶(PI)染色流式細胞術(shù)(FCM)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn):20μmol/L API和20ng/mL TRAIL以及兩者合用的人宮頸癌HeLa細胞凋亡率分別是3.56％±0.20%、6.69%±0.40%和59.87%±4.20%。20μmol/L API、20ng/mL TRAIL以及兩者合用48小時,ELISA檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)人宮頸癌HeLa細胞

4、Caspase-3的活性分別是培養(yǎng)基對照組的1.4、1.5和39倍。DNA瓊脂糖凝膠電泳顯示:20μmol/L的API預(yù)孵育4小時,再加入20 ng/mL的TRAIL處理44小時,展示出典型DNA梯形條帶圖譜。DCFH-DA熒光探針FCM檢測的結(jié)果發(fā)現(xiàn):API以濃度的方式增高人宮頸癌HeLa細胞活性氧水平。N-乙酰半胱氨酸能拮抗API增強TRAIL誘導(dǎo)細胞凋亡作用。
　　結(jié)論：
　　1.亞毒性濃度的API具有增強TRAIL誘