治療性低溫對(duì)窒息大鼠心肺復(fù)蘇后海馬神經(jīng)細(xì)胞活性氧及凋亡和自噬的影響.pdf

1、目的:觀察治療性低溫(TH)對(duì)窒息致心臟驟停(CA)大鼠自主循環(huán)恢復(fù)(ROSC)后其海馬神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)產(chǎn)生量和神經(jīng)功能的關(guān)系;并觀察低溫對(duì)大鼠海馬凋亡相關(guān)基因 caspase-3mRNA,自噬相關(guān)蛋白 LC3B和線粒體自噬標(biāo)志物 Parkin表達(dá)的影響。
　　方法:65只健康成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為2組:空白對(duì)照組(BC,n=5)和心肺復(fù)蘇組(CPR,n=60)。CPR組制作窒息法心肺復(fù)蘇模型,在ROSC后再隨機(jī)分為2

2、組:常溫CPR組(NT)和低溫CPR組(HT)。NT組在ROSC后保持37℃恒溫, HT組在ROSC后立即行低溫32℃干預(yù)4小時(shí)。根據(jù)觀察時(shí)點(diǎn)的不同,再將兩組CPR組隨機(jī)分2個(gè)亞組:即 ROSC后12小時(shí)和24小時(shí)組(NT-12,NT24,HT-12,HT-24)。到達(dá)觀察時(shí)點(diǎn)先對(duì)存活大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分(NDS),然后立即取雙側(cè)海馬組織,應(yīng)用流式法檢測(cè)大鼠海馬單細(xì)胞懸液ROS水平。利用透射電鏡觀察海馬神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞核和線粒體的超微結(jié)

3、構(gòu)形態(tài)學(xué)變化。利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)測(cè)定海馬神經(jīng)細(xì)胞caspase-3mRNA的表達(dá)水平;蛋白免疫印跡法(WB)測(cè)定海馬神經(jīng)細(xì)胞LC3B和Parkin蛋白水平。應(yīng)用SPSS19.0軟件包,計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(?x±s)表示,兩組間均數(shù)比較用成組t檢驗(yàn),多組間比較采用單因素方差分析LSD-t檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:60只大鼠中有44只(73％)成功ROSC,存活到觀察時(shí)點(diǎn)的有33只大鼠(55％)。NT和HT組各時(shí)

4、點(diǎn)的NDS明顯低于BC組(F=8.107, P<0.05),HT-12和HT-24組的NDS與相同時(shí)點(diǎn)的NT組比較有顯著提高(t=9.692, P<0.001;t=14.374, P<0.001)。NT和HT組各時(shí)點(diǎn)的ROS產(chǎn)生量明顯高于BC組(F=16.824, P<0.05),而HT-12和HT-24組的升高程度則明顯低于相同時(shí)點(diǎn)的NT組大鼠(t=9.836, P<0.001;t=7.499, P<0.001)。NT和 HT組各時(shí)點(diǎn)

5、的caspase-3mRNA表達(dá)量明顯高于 BC組(F=24.527, P<0.05),而HT-12和HT-24組的升高程度則明顯低于相同時(shí)點(diǎn)的NT組大鼠(t=6.935, P<0.001;t=4.317, P<0.001)。NT和HT組各時(shí)點(diǎn)的LC3B-II/I表達(dá)量明顯高于BC組(F=6.584, P<0.05),而HT-12和HT-24組的升高程度則明顯低于相同時(shí)點(diǎn)的NT組大鼠(t=10.836, P<0.001;t=2.653,

6、 P=0.02)。NT和HT組各時(shí)點(diǎn)的Parkin表達(dá)量明顯高于BC組(F=4.126, P<0.05),而HT-12和HT-24組的升高程度則明顯低于相同時(shí)點(diǎn)的NT組大鼠(t=4.027, P=0.001;t=5.505, P<0.001)。NT組海馬神經(jīng)細(xì)胞核和線粒體的形態(tài)學(xué)變化較BC組有明顯改變,HT組海馬神經(jīng)細(xì)胞核和線粒體與相同時(shí)點(diǎn)NT組比較損傷有所減輕。
　　結(jié)論:治療性低溫能減輕ROSC后大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞損傷并提高其神經(jīng)