?；切苋パ跄懰釋Υ笫蠹毙约顾钃p傷神經(jīng)細胞自噬的影響及對其保護作用.pdf

1、目的：探討?；切苋パ跄懰釋Ω牧?Allen’s重物打擊法構(gòu)建大鼠急性脊髓損傷模型神經(jīng)細胞自噬的影響。
　　方法：選取6-8周雄性 SD大鼠，體重250-300g共計72只。隨機分為三組：假手術(shù)組、手術(shù)組對照組（生理鹽水組）、?；切苋パ跄懰?TUDCA)組（分高低劑量兩個亞組）。分別于脊髓損傷后24小時、5天、10天處死實驗動物。參照 Basso Beattie Bresnahan(BBB)運動功能評分,對各組大鼠損傷后和猝死前作后

2、肢運動功能評分，比較對照組與TUDCA組大鼠在運動功能方面的差異性；采用電子顯微鏡，觀察神經(jīng)細胞中自噬現(xiàn)象的發(fā)生發(fā)展及TUDCA干預后受損脊髓神經(jīng)細胞的生物學特性；HE染色對比脊髓組織形態(tài)在光鏡下的差異；采用 Western blotting方法，檢測自噬相關(guān)因子（Beclin-1）在各組的表達情況；檢測凋亡相關(guān)因子caspass-3在各組的表達情況；并采用 RT-PCR方法分別檢測上述蛋白的mRNA表達。
　　結(jié)果： BBB運動

3、功能評分中假手術(shù)組大鼠的活動不受限。對照組與實驗組比較，對照組的BBB評分值明顯低于實驗組，反映到大鼠的活動上則可見活動性略差于實驗組。實驗組中高低藥物劑量對大鼠活動的影響無明顯差異，即生理鹽水組的運動功能評分明顯減弱。
　　采用電子顯微鏡，觀察神經(jīng)細胞中自噬現(xiàn)象的發(fā)生發(fā)展及TUDCA干預后受損脊髓神經(jīng)細胞的生物學特性；HE染色對比脊髓組織形態(tài)在光鏡下的差異。正常脊髓形態(tài)組織，脊髓神經(jīng)元及膠質(zhì)細胞完整，未見明顯壞死細胞。對照組損傷

4、處的脊髓組織，可以見到細胞呈空泡狀變性，其間大片的出血、水腫,細胞組織結(jié)構(gòu)疏松明顯，灰質(zhì)組織被破壞，伴有大量神經(jīng)元細胞壞死,而存活的神經(jīng)元細胞中，部分可見核固縮損傷處的脊髓組織。TUDCA處理的實驗組組，與對照組相比標本上同樣以出血、水腫和壞死為主要表現(xiàn)，但對照組最大的特點表現(xiàn)在，損傷中心附近的節(jié)段，同樣出現(xiàn)損傷,可以看到損傷范圍擴大，與其相鄰的神經(jīng)細胞破壞明顯,部分細胞形態(tài)有了較明顯的改變，實驗組中，雖然細胞損傷的范圍較之前同樣有所擴

5、大，但是和對照組相比，波及的范圍明顯較小，并且相鄰神經(jīng)細胞的破壞程度較輕。
　　采用 Western blotting方法，檢測自噬相關(guān)因子（Beclin-1）在各組的表達情況。實驗組Beclin-1的表達均高于對照組，并且有統(tǒng)計學差異，同樣TUDCA的給藥劑量的高低之間比較無明顯統(tǒng)計學差異。
　　采用 Western blotting方法，檢測凋亡相關(guān)因子（caspass-3）在各組的表達情況。SCI早期對照組大鼠各時間點