和厚樸酚對(duì)大鼠脊髓損傷神經(jīng)保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?研究和厚樸酚對(duì)大鼠脊髓損傷后炎癥反應(yīng)、氧自由基及凋亡的影響,探討和厚樸酚的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法:Sprague-Dawley雌性大鼠99只,體重為220-250g,隨機(jī)分為假手術(shù)組(SHAM組、33只)、脊髓損傷組(SCI組、33只)及和厚樸酚組(HNK組、33只)。采用Allen’s法制造大鼠胸10挫傷模型,SHAM組給予胸10椎板切除,不予打擊。HNK組術(shù)后1h給予20 mg/kg的和厚樸酚腹腔注射,

2、連續(xù)給藥3天。術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)各組分別取大鼠損傷脊髓節(jié)段,HE染色觀察組織病理學(xué)變化,ibal免疫組化觀察小膠質(zhì)細(xì)胞活化情況;ELISA檢測促炎癥因子水平;檢測MPO活性、SOD活性、MDA水平;免疫熒光染色、WESTERN BLOT觀察Caspase3表達(dá);神經(jīng)元Neun熒光染色、計(jì)數(shù)。術(shù)后后肢運(yùn)動(dòng)功能BBB評(píng)分,觀察2周。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.BBB評(píng)分結(jié)果:SHAM組評(píng)分基本沒有變化,SCI組、HNK組第一天評(píng)分為0分,SCI組

3、、HNK組大鼠后肢運(yùn)動(dòng)從第三天出現(xiàn)恢復(fù),評(píng)分呈上升趨勢。術(shù)后7天開始HNK組較SCI組,后肢運(yùn)動(dòng)功能明顯改善(P<0.05)。2.HE染色:術(shù)后24h電子光學(xué)顯微鏡下觀察到SHAM組鏡下見正常組織結(jié)構(gòu):灰、白質(zhì)分界清晰,細(xì)胞形態(tài)正常;SCI組可見組織水腫、出血、中性粒細(xì)胞浸潤及結(jié)構(gòu)疏松,灰白質(zhì)結(jié)構(gòu)分界不清等明顯病理改變;與脊髓損傷組相比,HNK組組織出血、水腫明顯減輕,灰白質(zhì)結(jié)構(gòu)分界可見。3.神經(jīng)元NeuN熒光染色結(jié)果:術(shù)后一周在損傷脊

4、髓節(jié)段周圍區(qū),各組均可見神經(jīng)元,與 SHAM組比較,SCI組與 HNK組神經(jīng)元減少(P<0.05),HNK組神經(jīng)元數(shù)量多于SCI組(P<0.05)。4.免疫組化觀察小膠質(zhì)細(xì)胞:術(shù)后24h,SHAM組中小膠質(zhì)細(xì)胞處于靜息狀態(tài);SCI組中活化小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯增多,胞體變圓、突起粗短;而HNK組中活化的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯減少。5.MPO活性檢測結(jié)果:MPO活性反應(yīng)了中性粒細(xì)胞浸潤、活化程度,術(shù)后24h時(shí)HNK組、SCI組與SHAM組比較,M

5、PO活性明顯升高,即中性粒細(xì)胞浸潤明顯增多,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P<0.01);與SCI組比較,HNK組MPO活性明顯降低(P<0.05)。6.ELISA檢測結(jié)果:術(shù)后24h與SHAM組相比,SCI組、HNK組TNF-a、IL-1β、IL-6水平均顯著升高(P<0.05)。HNK組較SHAM組TNF-a、IL-1β、IL-6水平明顯降低(P<0.05)。7.SOD、MDA檢測結(jié)果:術(shù)后24h與 SHAM組相比,HNK組、SCI組 SOD值均

6、升高、MDA含量均降低(P<0.05)。與SCI組相比,HNK組SOD值上升、MDA含量降低(P<0.05)。8.Caspase3免疫熒光結(jié)果:術(shù)后3d SCI組有大量Caspase3表達(dá)陽性細(xì)胞;HNK組 Caspase3陽性細(xì)胞較 SCI組明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。9.C-caspase3 Western Blot結(jié)果:術(shù)后3d SHAM組 C-caspase3水平較低;與SHAM組比,SCI組、HNK組C-cas