PPARγ激動(dòng)劑對(duì)脊髓損傷神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制研究.pdf

1、急性脊髓損傷(AcuteSpinalCordInjury，ASCI)是一種嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)損傷，SCI可導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)功能障礙，常遺留嚴(yán)重傷殘，給個(gè)人、家庭和社會(huì)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。治療急性脊髓損傷，恢復(fù)或者減少神經(jīng)損害，具有重要的意義。急性脊髓損傷目前分為原發(fā)性脊髓損傷和繼發(fā)性脊髓損傷。繼發(fā)性脊髓損傷具有可逆性，可被控制，因此說(shuō)繼發(fā)性脊髓損傷決定了患者病情的最后轉(zhuǎn)歸。目前急性脊髓損傷治療的關(guān)鍵切入點(diǎn)在于繼發(fā)性脊髓損傷的治療。炎癥反應(yīng)是脊髓繼發(fā)性

2、損傷的主要因素。過(guò)氧化物酶增殖物激活受體(peroxisomeProliferateractivatedreceptor，PPARγ)是一類(lèi)配體激活的核轉(zhuǎn)錄因子超家族成員。最近研究發(fā)現(xiàn)在腦組織中PPARγ激動(dòng)劑具有抗炎和抑制神經(jīng)凋亡保護(hù)作用。關(guān)于PPAR7對(duì)SCI的研究很少，它能否保護(hù)脊髓神經(jīng)元；促抑制脊髓損傷后炎癥性因子的分泌。本研究的目的是觀察PPARγ激動(dòng)劑羅格列酮對(duì)大鼠SCI后的修復(fù)作用，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行研究，為臨床SCI提供治療

3、策略。
　　 第一部分過(guò)氧化物酶增殖激活型受體γ(PPARγ)在大鼠脊髓組織中的表達(dá)
　　 目的：本實(shí)驗(yàn)旨在闡述實(shí)驗(yàn)性脊髓損后過(guò)氧化物酶增殖激活型受體γ的表達(dá)及時(shí)間分布規(guī)律。方法：10周齡SPF級(jí)50只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和損傷組。對(duì)照組大鼠，僅做椎板切除術(shù)，損傷組采用改良Allen法制作大鼠急性脊髓損傷(SCI)模型，分別于傷后ld、3d、7d、14d(每時(shí)間點(diǎn)10只)處死取材。采用免疫組織化學(xué)，RT-PCR和Wes

4、ternblot法分別檢測(cè)檢測(cè)脊髓組織中過(guò)氧化物酶體增殖激活型受體γmRNA和蛋白的表達(dá)。結(jié)果：正常脊髓過(guò)氧化物酶增殖性受體PPARγmRNA表達(dá)量較低，脊髓損傷后ld、3d、7d、14d各時(shí)間點(diǎn)過(guò)氧化物酶增殖性受體PPARTmRNA表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組(p<0.05)。大鼠脊髓損傷后ld可見(jiàn)PPARγ表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞明顯增多，在損傷后3d陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)達(dá)到高峰。正常組織中過(guò)氧化物酶體增殖激活型受體γ蛋白表達(dá)很弱。脊髓損傷組PPARγ蛋白表

5、達(dá)較假手術(shù)組明顯增高。但損傷后7d、14d的表達(dá)值仍高于假手術(shù)組。結(jié)論：正常組織中PPARγ表達(dá)很弱。脊髓損傷后PPARγ表達(dá)增加，與脊髓損傷時(shí)間之間存在時(shí)效關(guān)系，將PPARγ作為一靶點(diǎn)，利用其激活劑對(duì)其進(jìn)行干預(yù)可以對(duì)脊髓損傷產(chǎn)生保護(hù)作用。
　　 第二部分PPARγ受體激動(dòng)劑對(duì)大鼠脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響
　　 目的：觀察PPARγ受體激動(dòng)劑對(duì)大鼠脊髓損傷后細(xì)胞凋亡的影響。方法：10周齡SPF級(jí)120只SD大鼠隨機(jī)分

6、為對(duì)照組和損傷組，干預(yù)組。對(duì)照組大鼠，僅做椎板切除術(shù)，損傷組采用改良Allen法制作大鼠急性脊髓損傷(SCI)模型。干預(yù)組損傷模型成功后，通過(guò)腹腔注射PPARγ受體激動(dòng)劑羅格列酮(2mg/kg)。分別于傷后ld、3d、7d、14d(每時(shí)間點(diǎn)10只)處死取材對(duì)脊髓損傷區(qū)進(jìn)行HE染色，透射電鏡，細(xì)胞凋亡TUNEL標(biāo)記，DNAladder，RT-PCR和Western檢測(cè)bax，bcl-2的表達(dá)變化，同時(shí)采用BBB評(píng)分方法觀察神經(jīng)功能恢復(fù)情況