大鼠脊髓損傷后TNF-α對神經(jīng)細胞凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　 大鼠急性脊髓損傷后,神經(jīng)細胞的死亡方式包括壞死和凋亡。凋亡發(fā)生是一個復(fù)雜的,由Caspase家族成員介導(dǎo)的蛋白酶級聯(lián)反應(yīng)過程,Caspase-3是哺乳動物細胞凋亡中的關(guān)鍵蛋白酶,是凋亡下游的關(guān)鍵執(zhí)行者。TNF-α釋放后能特異性地與廣泛分布于各種細胞膜表面的受體結(jié)合,激活Caspase-3導(dǎo)致細胞凋亡。本研究檢測了TNF-α在大鼠壓迫模型脊髓組織中的動態(tài)表達,并探討了其與Caspase-3之間的相關(guān)性,為凋亡相關(guān)疾病

2、的防治提供了思路和良好的理論基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 取健康成熟SD大鼠70只,雌雄不限,體質(zhì)量220-250g,由中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。隨機分為:損傷組:脊髓損傷后2h、8h、24h、3d、7d共5個時間點,每個時間點10只;空白對照組:10只,不做任何處理:抑制劑組:脊髓損傷后皮下注射。TNF-α抑制劑(依那西普)0.36mg/kg,1d取材,10只。HE染色觀察脊髓組織病理學(xué)變化,免疫組化測定各時間點TN

3、F-α和Caspase-3的表達變化,原位末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧尿苷三磷酸(dUTP)標(biāo)記法(TUNEL,法)檢測神經(jīng)細胞的凋亡水平。采用SPSS17.0軟件包進行統(tǒng)計,各組數(shù)據(jù)采用x±s表示,TNF-α、Caspase-3陽性細胞率及神經(jīng)細胞凋亡細胞率各組比較采用方差分析。TNF-α、Caspase-3陽性細胞率與神經(jīng)細胞凋亡細胞率相關(guān)性采用直線相關(guān)分析。以P<0.05為有差異,P<0.01為有顯著性差異。
　　 結(jié)

4、果：
　　 免疫組化結(jié)果顯示正常組大鼠脊髓神經(jīng)細胞TNF-α、Caspase-3、TUNEL陽性細胞率較少,脊髓損傷后8h,TNF-α陽性細胞率明顯增多,1d達高峰,3d表達減弱。Caspase-3陽性細胞率在脊髓損傷后8h明顯增多,1d達高峰,3d表達減弱。TUNEL陽性細胞率也在8h明顯增多,1d達高峰,3d表達減弱。TNF-α抑制劑組TNF-α、caspase-3、TUNEL陽性細胞率明顯減少。
　　 結(jié)論：