BMSCs移植聯(lián)合應(yīng)用NT-3對(duì)大鼠脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡及損傷修復(fù)的作用.pdf

1、目的：研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植（Bone marrow-derived mesenchymal stem cells，BMSCs）聯(lián)合神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素-3（neurotrophin-3，NT-3）對(duì)大鼠皮質(zhì)脊髓束橫斷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡及脊髓損傷修復(fù)的影響及意義。 方法：采用密度梯度離心與貼壁篩選法相結(jié)合制備大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，選用清潔級(jí)健康Sprague-Dawley（SD）大鼠200只，體重250-300g，雌雄不限，在相當(dāng)于T8椎板

2、水平用做好標(biāo)記的顯微剪刀剪斷脊髓的背側(cè)2/3，建立大鼠皮質(zhì)脊髓束橫斷損傷模型。隨機(jī)分成手術(shù)對(duì)照組（n=50）、NT-3組（n=50）、BMSCs移植組（n=50）、BMSCs移植聯(lián)合NT-3組（n=50）。每組中取5只，在手術(shù)前及手術(shù)后1d、1w、2w、3w及4w，采用BBB（Basso，Beattle，Bresnahan）評(píng)分評(píng)價(jià)運(yùn)動(dòng)功能，然后取出脊髓組織檢測(cè)相對(duì)分子質(zhì)量為200000的神經(jīng)中絲蛋白（neurofilaments，NF

3、）免疫組織化學(xué)活性的變化。其余對(duì)照組及BMSCs移植組、BMSCs移植聯(lián)合NT-3組、NT-3組動(dòng)物于損傷后2h、4h、6h、8h、12h、1d、3d、7d和14d取出傷段脊髓，分別行RT-PCR（reverse transcription-polymerase chain reaction）檢測(cè)bax和bcl-x1基因表達(dá)的變化，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5只大鼠。所得數(shù)據(jù)采用組間均數(shù)比較t檢驗(yàn)和組內(nèi)方差分析，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果：1、脊髓

4、損傷后雙后肢癱瘓，BBB評(píng)分，2w、3w和4w點(diǎn)NT-3組、BMSCs移植組、BMSCs移植聯(lián)合NT-3組移植組明顯高于損傷對(duì)照組，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；BMSCs移植聯(lián)合NT-3組高于NT-3組、BMSCs移植組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；2、損傷后bax及bcl-x1基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平升高，但bax基因增加更加明顯；3、NT-3組、BMSCs移植組與手術(shù)對(duì)照組相比bax基因轉(zhuǎn)錄水平下降而bcl-x1基因轉(zhuǎn)錄水平升高

5、（P<0.05）；BMSCs移植聯(lián)合NT-3組與NT-3組、BMSCs移植組比bax基因轉(zhuǎn)錄水平下降而bcl-x1基因轉(zhuǎn)錄水平升高明顯（P<0.05）。4、NF免疫組化結(jié)果顯示，BMSCs移植聯(lián)合NT-3組平均灰度值明顯小于其他三組，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。 結(jié)論：（1）脊髓損傷后NF表達(dá)增加，且NT-3、BMSCs可以促進(jìn)NF的表達(dá)；（2）NT-3、BMSCs可能通過(guò)影響凋亡基因bax和bcl-x1表達(dá)的變化，對(duì)脊髓