BMSCs移植聯(lián)合VEGF對(duì)大鼠脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡和神經(jīng)功能恢復(fù)的研究.pdf

1、目的：探索骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）移植聯(lián)合鞘內(nèi)注射血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）對(duì)SD大鼠急性脊髓損傷(SCI)后神經(jīng)細(xì)胞凋亡和神經(jīng)功能恢復(fù)的影響。
　　方法：通過(guò)密度梯度離心的方法制備大鼠BMSCs。采用雄性Sprapue-dawley（SD）大鼠140只，重量200~250g。利用動(dòng)脈瘤夾鉗夾大鼠胸10脊髓建立SD大鼠T10脊髓損傷模型。隨機(jī)分成手術(shù)對(duì)照組（A組），BMSCs移植組（B組），VEGF組（C組），BMSCs移

2、植聯(lián)合VEGF組（D組），每組35只。從每組中隨機(jī)取5只，在術(shù)前1d，術(shù)后1d、3d、7d、14d、21d、28d進(jìn)行BBB運(yùn)動(dòng)功能的雙盲評(píng)分檢測(cè)，然后取出傷段脊髓組織，通過(guò)免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)神經(jīng)中絲蛋白NF200的變化。每組動(dòng)物再按照觀察時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分成術(shù)后4h組、8h組、1d組、3d組、7d組、14d組，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5只，在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取出傷段脊髓組織，用RT-PCR法檢測(cè)bax和bcl-2基因表達(dá)的情況。然后把所獲取的數(shù)據(jù)資料通

3、過(guò)組內(nèi)方差分析和組間均數(shù)LSD-t檢驗(yàn)的方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：（1）、采用密度梯度離心的方法成功提取了BMSCs，它可以在體外進(jìn)行傳代、培養(yǎng)、擴(kuò)增，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)后確定所培養(yǎng)的細(xì)胞為BMSCs。（2）、制作SD大鼠SCI模型后1d，所有大鼠出現(xiàn)雙側(cè)后肢運(yùn)動(dòng)功能障礙，BBB評(píng)分均小于1分，各組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；術(shù)后3d、1w等時(shí)間點(diǎn)各組大鼠間BBB評(píng)分無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)；在術(shù)后2w、3w、4w的各時(shí)間點(diǎn)，B、

4、C、D組的BBB評(píng)分要明顯高于A組，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），D組的BBB評(píng)分要比B、C組高，具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；B、C兩組之間BBB評(píng)分無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。（3）、脊髓損傷后，各組大鼠bax和bcl-2基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)均上升，但基因bax表達(dá)量更高；相比于A組，B組、C組的bc l-2基因表達(dá)量更高（P<0.05），bax基因表達(dá)量更低（P<0.05）；B組、C組與D組相比，bcl-2基因表達(dá)量降低

5、（P<0.05），而bax基因表達(dá)量升高（P<0.05）。（4）、NF免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明，D組平均灰度值明顯低于A、B、C三組，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　結(jié)論：（1）BMSCs和VEGF能夠促進(jìn)脊髓損傷后NF的表達(dá)，加快神經(jīng)功能恢復(fù)；（2）BMSCs、VEGF對(duì)凋亡基因bax、bcl-2的表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用，從而減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡，促進(jìn)脊髓功能恢復(fù)；（3）BMSCs移植聯(lián)合應(yīng)用VEGF對(duì)抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡，保護(hù)脊髓