N6對脊髓損傷后神經(jīng)細胞凋亡的影響.pdf

1、第一部分:
　　 N6對脊髓損傷后神經(jīng)細胞凋亡作用的實驗研究
　　 目的:
　　 研究N6（促神經(jīng)再生因子復(fù)合劑）對脊髓損傷后神經(jīng)細胞凋亡的影響。
　　 方法:
　　 采用Allen's法經(jīng)NYU脊髓損傷撞擊器制作大鼠急性SCI模型，實驗共分4組:假手術(shù)組（A組，只摘除椎板未損傷脊髓），單純脊髓損傷組（B組），脊髓損傷+生理鹽水治療組（C組），脊髓損傷+N6治療組（D組）。損傷后72h取材，采用H

2、E染色對脊髓組織進行標記;免疫組化方法檢測Caspase3蛋白的表達;逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)檢測凋亡相關(guān)基因Caspase3、Fas、Bax、Bcl2、P53mRNA在脊髓組織中的表達變化，Western-Blot檢測各組脊髓組織中凋亡相關(guān)蛋白Bcl2的表達變化。
　　 結(jié)果:
　　 免疫組化結(jié)果顯示A組Caspase3陽性表達細胞數(shù)很少;B組及C組Caspase3陽性表達細胞數(shù)較A組明顯增加(P＜0.0

3、5);D組較B、C陽性表達細胞數(shù)明顯減少(P＜0.05)。RT-PCR檢測到Caspase-3、Fas、P53mRNA水平D組較B、C組明顯降低(P＜0.05);Bcl2/Bax值，D組較B、C組明顯升高(P＜0.05)。Western-Blot結(jié)果示:A組Bcl2大量表達，B、C組明顯降低，D組較B、C組明顯升高，結(jié)果具有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論:
　　 N6（促神經(jīng)再生因子復(fù)合劑）能明顯抑制脊髓損傷后神經(jīng)細胞的凋亡。

4、
　　 第二部分:
　　 N6抑制谷氨酸介導(dǎo)培養(yǎng)脊髓神經(jīng)元凋亡作用的實驗研究
　　 目的:
　　 探討N6（促神經(jīng)再生因子復(fù)合劑）在谷氨酸介導(dǎo)的脊髓神經(jīng)元凋亡過程中所起的保護作用。
　　 方法:
　　 取妊娠13dWistar大鼠的胎鼠，分離出脊髓神經(jīng)細胞并進行體外原代神經(jīng)元的純化培養(yǎng)，建立谷氨酸對培養(yǎng)細胞的損傷模型，觀察加用N6保護后細胞形態(tài)的變化，用吖啶橙(AO)、溴化已啶(EB)、H

5、ochest熒光染色法、Tunel法觀測凋亡細胞數(shù)量的變化，CCK8檢測細胞活性的變化;實驗分為3組:對照組（C組），谷氨酸損傷組(Glu組)，谷氨酸損傷+N6處理組（N6組）;每組4個平行皿，實驗重復(fù)3次。
　　 結(jié)果:
　　 C組凋亡細胞少見;Glu組凋亡細胞明顯增加，細胞活性明顯降低;N6組凋亡細胞數(shù)明顯減少，細胞活性明顯增加，結(jié)果均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 促神經(jīng)再生因子