環(huán)孢素A對(duì)大鼠急性脊髓損傷后iNOS表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：探討急性脊髓損傷后應(yīng)用環(huán)孢素A(CsA)對(duì)iNOS表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響。 方法：建立大鼠急性脊髓損傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。108只大鼠隨機(jī)分成分成單純椎板切除組(對(duì)照組)、脊髓損傷組(損傷組)，脊髓損傷后CsA治療組(治療組)。不同時(shí)間點(diǎn)麻醉處死、插管灌注、損傷節(jié)段脊髓取材、固定過(guò)夜、包埋、切片。用HE染色觀察損傷脊髓病理變化；用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測(cè)iNOS表達(dá)變化，原位末端標(biāo)記法(TUNEL法)標(biāo)記細(xì)胞凋亡；利用H

2、PIAS-2000高清晰度彩色病理圖文報(bào)告管理系統(tǒng)對(duì)iNOS的表達(dá)進(jìn)行定量分析，通過(guò)顯微鏡下凋亡指數(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。 結(jié)果：1、HE染色后光鏡下觀察：對(duì)照組大鼠脊髓可見(jiàn)白質(zhì)、灰質(zhì)和灰質(zhì)中的前角與后角以及中央管。損傷組及治療組傷后6h脊髓已出血，尚無(wú)壞死。隨著時(shí)間延長(zhǎng)，損傷組脊髓出現(xiàn)廣泛灶性出血及出血后形成的囊腔，神經(jīng)元變性壞死、溶解，有大量小膠質(zhì)細(xì)胞增生和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。隨著時(shí)間延長(zhǎng)，治療組脊髓有灶性出血，神經(jīng)元細(xì)胞腫脹，部分神經(jīng)

3、細(xì)胞變性壞死，但出血、小膠質(zhì)細(xì)胞增生和炎細(xì)胞浸潤(rùn)均較損傷組輕。2、iNOS在對(duì)照組大鼠脊髓呈可疑陽(yáng)性表達(dá)，損傷組大鼠脊髓呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，治療組大鼠脊髓呈弱陽(yáng)性表達(dá)。損傷后6h損傷組和治療組即有iNOS表達(dá)；損傷后7diNOS表達(dá)達(dá)高峰，10d表達(dá)明顯減弱。治療組iNOS表達(dá)較損傷組低，高峰發(fā)生在損傷后3d。三組各時(shí)間點(diǎn)的圖像分析結(jié)果經(jīng)單因素方差分析，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(6h：F=89.449，P<0.01；12h：F=24.640，P<0.

4、01；24h：F=72.699，P<0.01；3d：F=190.527，P<0.01；7d：F=160.347，P<0.01；10d：F=328.885，P<0.01)。3、對(duì)照組大鼠脊髓可見(jiàn)散在、少量TUNEL標(biāo)記陽(yáng)性細(xì)胞，損傷組可見(jiàn)多量TUNEL標(biāo)記陽(yáng)性細(xì)胞，治療組可見(jiàn)中等量TLJNEL標(biāo)記陽(yáng)性細(xì)胞。損傷后6h損傷組和損傷后CsA治療組即有TUNEL標(biāo)記陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)；損傷后7dTUNEL標(biāo)記陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)達(dá)高峰，損傷后10dTUNEL

5、標(biāo)記陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)則明顯減少。治療組TUNEL標(biāo)記陽(yáng)性細(xì)胞較損傷組低，高峰發(fā)生在損傷后3d，以后逐漸降低。三組各時(shí)間點(diǎn)的凋亡指數(shù)結(jié)果經(jīng)單因素方差分析，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(6h：P=180.432，P<0.01：12h：F=491.523，P(0.01；24h：F=594.093，P<0.01；3d：F=1110.324，P<0.01；7d：F=837.660，P<0.01；10d：F=389.124,P<0.01)。 結(jié)論：CsA能