環(huán)孢素A對大鼠急性脊髓損傷后iNOS表達及細胞凋亡的影響.pdf

1、目的：探討急性脊髓損傷后應用環(huán)孢素A(CsA)對iNOS表達及細胞凋亡的影響。 方法：建立大鼠急性脊髓損傷實驗動物模型。108只大鼠隨機分成分成單純椎板切除組(對照組)、脊髓損傷組(損傷組)，脊髓損傷后CsA治療組(治療組)。不同時間點麻醉處死、插管灌注、損傷節(jié)段脊髓取材、固定過夜、包埋、切片。用HE染色觀察損傷脊髓病理變化；用免疫組織化學EnVision法檢測iNOS表達變化，原位末端標記法(TUNEL法)標記細胞凋亡；利用H

2、PIAS-2000高清晰度彩色病理圖文報告管理系統(tǒng)對iNOS的表達進行定量分析，通過顯微鏡下凋亡指數(shù)檢測細胞凋亡。 結(jié)果：1、HE染色后光鏡下觀察：對照組大鼠脊髓可見白質(zhì)、灰質(zhì)和灰質(zhì)中的前角與后角以及中央管。損傷組及治療組傷后6h脊髓已出血，尚無壞死。隨著時間延長，損傷組脊髓出現(xiàn)廣泛灶性出血及出血后形成的囊腔，神經(jīng)元變性壞死、溶解，有大量小膠質(zhì)細胞增生和中性粒細胞浸潤。隨著時間延長，治療組脊髓有灶性出血，神經(jīng)元細胞腫脹，部分神經(jīng)

3、細胞變性壞死，但出血、小膠質(zhì)細胞增生和炎細胞浸潤均較損傷組輕。2、iNOS在對照組大鼠脊髓呈可疑陽性表達，損傷組大鼠脊髓呈強陽性表達，治療組大鼠脊髓呈弱陽性表達。損傷后6h損傷組和治療組即有iNOS表達；損傷后7diNOS表達達高峰，10d表達明顯減弱。治療組iNOS表達較損傷組低，高峰發(fā)生在損傷后3d。三組各時間點的圖像分析結(jié)果經(jīng)單因素方差分析，差別有統(tǒng)計學意義(6h：F=89.449，P<0.01；12h：F=24.640，P<0.

4、01；24h：F=72.699，P<0.01；3d：F=190.527，P<0.01；7d：F=160.347，P<0.01；10d：F=328.885，P<0.01)。3、對照組大鼠脊髓可見散在、少量TUNEL標記陽性細胞，損傷組可見多量TUNEL標記陽性細胞，治療組可見中等量TLJNEL標記陽性細胞。損傷后6h損傷組和損傷后CsA治療組即有TUNEL標記陽性細胞表達；損傷后7dTUNEL標記陽性細胞表達達高峰，損傷后10dTUNEL

5、標記陽性細胞表達則明顯減少。治療組TUNEL標記陽性細胞較損傷組低，高峰發(fā)生在損傷后3d，以后逐漸降低。三組各時間點的凋亡指數(shù)結(jié)果經(jīng)單因素方差分析，差別有統(tǒng)計學意義(6h：P=180.432，P<0.01：12h：F=491.523，P(0.01；24h：F=594.093，P<0.01；3d：F=1110.324，P<0.01；7d：F=837.660，P<0.01；10d：F=389.124,P<0.01)。 結(jié)論：CsA能