EPO對大鼠急性脊髓損傷后pCREB及Bcl-2表達的影響.pdf

1、目的：
　　 急性脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)具有復雜的病理過程,可以引起神經組織和血管結構的破壞,由于其會造成深遠的功能障礙,需要長期的治療和經濟支出。從病理的角度,脊髓損傷分為原發(fā)性損傷和繼發(fā)性損傷。原發(fā)性損傷本身直接破壞神經組織,通常只造成圍繞損傷中心有限細胞的死亡。脊髓繼發(fā)性損傷擴大了損傷范圍,且其造成的損害遠遠大于原發(fā)性損傷。繼發(fā)性損傷引起廣泛脫髓鞘反應、組織水腫及不可逆的細胞喪失。目前臨床

2、上只能夠對SCI的繼發(fā)性損傷進行治療,防止損傷的進一步加劇,最大程度地恢復脊髓功能。對脊髓損傷的治療尚缺乏有效、毋庸置疑的治療方法。甲氫潑尼松琥珀酸鈉(methyl predni solonesodium succinatc,MPSS)是對脊髓損傷患者標準的干預方法。經臨床證實它能改善SCI后患者神經功能并已得到廣泛應用。但是MPSS治療方案最近幾年得到了一些質疑,它可能引起一些不良反應如加重缺血、加重神經炎性反應及抑制神經保護因子。促

3、紅細胞生成素(Erythropoietin,EPO)能夠控制體內的組織氧合作用。人重組紅細胞生成素(RecombinanthumanEPO,rHuEPO)生物學上類似于天然的激素,通常被用于治療貧血患者。最近研究證明內源性或外源性激活EPO受體能夠阻止脊髓損傷后神經元的死亡,外源性EPO已應用于不同類型的脊髓損傷以改善氧化應激和炎性損傷。本實驗通過建立大鼠急性脊髓損傷模型,應用免疫組化技術,檢測用及不用rHuEPO治療不同時間點pCRE

4、B和Bcl-2表達量的變化,初步探討EPO對脊髓損傷的保護機制。
　　 方法：
　　 取健康成年SD大鼠60只,雌雄不限,體重280-350g,由中國醫(yī)科大學實驗動物中心提供。隨機分為四組:(1)正常組6只,僅給予麻醉;(2)假手術組6只,麻醉后行椎板切除術;(3)對照組,建立脊髓損傷模型后腹腔注射生理鹽水,分為術后2h、8h、24h、48h組,每組6只;(4)實驗組,建立脊髓損傷模型后腹腔注射rHuEPO(濟脈新,華北

5、制藥)1000u/kg,分為術后2h、8h、24h、48h組,每組6只。HE染色觀察脊髓組織病理學變化,免疫組化測定各時間點pCREB、Bcl-2的表達變化。用SPSS15.0軟件包進行統(tǒng)計,各組數據采用均數士標準差((x)±s)表示,組間比較采用單因素方差分析,組間存在統(tǒng)計學意義時,并采用Post-hocLSD檢驗進行兩兩比較,以P<0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：
　　 鏡下觀察可見正常和假手術組脊髓組織結構正

6、常,神經元形態(tài)完好,核仁清晰,灰白質界限清楚,外周白質致密有序。損傷組表現為脊髓損傷段有廣泛出血,脊髓結構破壞,并有炎癥細胞浸潤。損傷中心部位有大量的神經細胞溶解死亡,白質中可見腫脹軸突和大量空泡,部分神經元尼氏體消失,核固縮?；屹|中僅存少量的神經元。EPO實驗組鏡下可見壓迫區(qū)也有出血壞死,但脊髓結構的破壞程度較對照組輕,空泡區(qū)明顯少于對照組,炎癥反應較對照組減弱。正常組和假手術組pCREB、Bcl-2陽性細胞少見,對照組pCREB2h

7、開始出現陽性細胞,24h達高峰,48h時陽性細胞減少。實驗組與對照組相比,同一時點前者pCREB表達較后者增多。差異有統(tǒng)計學意義,2h和8h(P<0.05),24h和48h(P<0.01)。對照組和實驗組2h開始出現Bcl-2陽性細胞,直到48h,一直持續(xù)升高。實驗組與對照組同一時點相比,Bcl-2表達2h無統(tǒng)計學意義(P>0.05),8h(P<0.05),24h(P<0.01),48h(P<0.01)差異均有統(tǒng)計學意義。