嗅鞘細(xì)胞移植聯(lián)合應(yīng)用甲基強(qiáng)的松龍對(duì)急性脊髓損傷大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)及Nogo-A表達(dá)的影響.pdf

1、目的： 研究嗅鞘細(xì)胞(Olfactory ensheathing Cells，OECs)移植聯(lián)合應(yīng)用大劑量甲基強(qiáng)的松龍對(duì)急性脊髓損傷大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)及Nogo-A表達(dá)的影響。并對(duì)其相關(guān)機(jī)制進(jìn)行探討。 方法： 采用改良Nash法分離、原代純化培養(yǎng)大鼠嗅球嗅鞘細(xì)胞；雌性SD大鼠126只，隨機(jī)分成空白對(duì)照組(normal組，n=6)、假手術(shù)組(sham組，n=24)、損傷對(duì)照組(Spinal Cord Injury，S

2、CI組n=24)、嗅鞘細(xì)胞移植組(OECs組，n=24)、甲基強(qiáng)的松龍注射組(MP組，n=24)以及聯(lián)合干預(yù)組(OECs+MP組，n=24)共6組；參照改良Allen's打擊法，建立急性挫傷型大鼠脊髓損傷模型，OECs組、OECs+MP組于脊髓損傷后即刻進(jìn)行嗅鞘細(xì)胞原位移植，所注射的嗅鞘細(xì)胞在移植前進(jìn)行DAPI標(biāo)記；MP組則經(jīng)尾靜脈注射大劑量甲基強(qiáng)的松龍，持續(xù)24小時(shí)；OECs+MP組在嗅鞘細(xì)胞移植的同期經(jīng)尾靜脈注射與MP組同等劑量的甲

3、基強(qiáng)的松龍，術(shù)后1d、3d、7d、14d，參照BBB法進(jìn)行各組神經(jīng)功能檢測(cè)，之后處死動(dòng)物取材，熒光顯微鏡下觀察嗅鞘細(xì)胞的存活情況，并行免疫組織化學(xué)法及半定量RT-PCR法檢測(cè)Nogo-A表達(dá)的變化。 結(jié)果： OECs組、OECs+MP組不同時(shí)間點(diǎn)脊髓損傷區(qū)周邊白質(zhì)均觀察到DAPI染色的陽(yáng)性細(xì)胞；SCI+OECs組和SCI+MP組在7d、14d BBB神經(jīng)功能評(píng)分要優(yōu)于損傷對(duì)照組(P<0.05)，但低于SCI+OECs+M

4、P組(P<0.05)；SCI+OECs組和SCI+MP組之間的神經(jīng)功能評(píng)分在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)差異均無(wú)顯著性(P>0.1)；SCI后1d、3d，各組間神經(jīng)功能行為學(xué)評(píng)分無(wú)顯著性差異(P>0.05)；免疫組化和RT-PCR法顯示：SCI后3d、7d、14d，SCI+OECs組和SCI+MP組Nogo-A的表達(dá)量與SCI組相比，均呈明顯下調(diào)(P<0.01)；但其下調(diào)Nogo-A效應(yīng)低于SCI+OECs+MP組(P<0.01)。 結(jié)論：