英夫利昔單抗聯(lián)合甲基強的松龍對大鼠急性脊髓損傷模型NF-κB、TRADD及FADD表達的影響.pdf

1、目的:采用改良Allen's打擊法建立大鼠急性脊髓損傷模型,評價英夫利昔單抗、甲基強的松龍及二者聯(lián)合對損傷節(jié)段脊髓組織NF-kB(nuclear factor Kappa B)、TRADD(Tumor necrosis factorreceptor associated death domain)和FADD(Fas associated death domain)表達的影響。探討英夫利昔單抗聯(lián)合甲基強的松龍對急性脊髓損傷的治療效果及發(fā)生

2、機制。
　　 材料和資料:正常成年雄性SD大鼠90只,隨機分為6組:(1)正常對照組(Group NC,n=15),(2)假手術組(Group SO,n=15),(3)安慰劑治療組(Group NS,n=15),(4)甲基強的松龍治療組(Group MP,n=15),(5)英夫利昔單抗治療組(GmupIN,n=15),(6)英夫利昔單抗聯(lián)合甲基強的松龍治療組(Group I+M,n=15)。除假手術組僅做椎板切除不予打擊、治療處

3、理和正常對照組外,其余實驗組均采用改良Allen's打擊法制作T10水平的急性脊髓損傷模型并于脊髓損傷即刻給予相應的藥物治療(甲基強的松龍30mg/kg腹腔注射,英夫利昔單抗5mg/kg腹腔注射,安慰劑所用劑量與其他藥物治療組所用溶劑的劑量相等腹腔注射)。動物模型建立成功后,每組取5只大鼠觀察其脊髓功能的行為學BBB評分(觀察21天);其余動物均于脊髓損傷后第24h取材,每組取5只大鼠脊髓標本進行免疫組織化學染色,觀察并比較各組脊髓標本

4、NF-kB、TRADD和FADD的表達情況;同時,每組再取5只大鼠脊髓標本使用液氮保存,進行RT-PCR反應,觀察并比較各組脊髓標本NF-kB mRNA、TRADD mRNA和FADD mRNA的表達情況。
　　 結果:
　　 (1)BBB評分:急性脊髓損傷模型建立成功后,模型組大鼠的BBB評分迅速下降,隨后隨時間的延長又逐漸上升。在傷后第14和21天,英夫利昔單抗治療組、甲基強的松龍治療組和英夫利昔單抗聯(lián)合甲基強的松龍

5、治療組大鼠的BBB評分均高于安慰劑治療組(p＜0.05),同時,英夫利昔單抗聯(lián)合甲基強的松龍治療組大鼠的BBB評分又高于單獨使用英夫利昔單抗和甲基強的松龍治療組(p＜0.05)。
　　 (2)免疫組織化學結果:在急性脊髓損傷后第24小時,英夫利昔單抗治療組、甲基強的松龍治療組及英夫利昔單抗聯(lián)合甲基強的松龍治療組大鼠脊髓標本NF-kB、TRADD和FADD表達陽性的細胞數(shù)均少于安慰劑治療組(p＜0.05),且英夫利昔單抗聯(lián)合甲基強

6、的松龍治療組大鼠脊髓標本NF-kB、TRADD和FADD表達陽性的細胞數(shù)又少于單獨使用甲基強的松龍和英夫利昔單治療組(p＜0.05)。
　　 (3)RT-PCR結果:在急性脊髓損傷后第24小時,英夫利昔單抗治療組、甲基強的松龍治療組及英夫利昔單抗聯(lián)合甲基強的松龍治療組大鼠脊髓標本NF-kB mRNA、TRADD mRNA和FADD mRNA的表達水平均低于安慰劑治療組(p＜0.05);且英夫利昔單抗聯(lián)合甲基強的松龍治療組大鼠脊髓

7、標本NF-kB mRNA、TRADD mRNA和FADD mRNA的表達水平又低于單獨使用甲基強的松龍和英夫利昔單抗治療組(p＜0.05)。
　　 結論:
　　 (1)英夫利昔單抗、甲基強的松龍均可通過降低NF-kB、TRADD和FADD的表達,減輕脊髓繼發(fā)性損傷和促進脊髓損傷后神經(jīng)功能障礙恢復。
　　 (2)英夫利昔單抗和甲基強的松龍在抑制。NF-kB、TRADD和FADD的表達方面有較好地協(xié)同作用,二者聯(lián)用比