甲基強的松龍對急性脊髓損傷Nogo-A蛋白表達影響的實驗研究.pdf

1、研究背景 隨著交通和建筑業(yè)的迅速發(fā)展，急性脊柱脊髓損傷患者增加，在美國每年大約有10，000人患有嚴重的脊髓損傷。大多數(shù)損傷患者源于交通意外，墜落傷，暴力或運動損傷。脊髓損傷的患者大多數(shù)是健康的青壯年，常給患者家庭社會帶來沉重的負擔。因此研究脊髓損傷的治療具有重要意義，也是目前世界上需待解決和研究的重點課題之一。 急性脊髓損傷治療主要分為手術治療和非手術治療。手術治療的目的是通過手術減壓、固定解除受傷節(jié)段脊髓所受到的壓迫

2、并恢復脊柱的解剖結構和保持其穩(wěn)定性，防止繼發(fā)性脊髓損傷，保存殘留的神經(jīng)單元，為受損脊髓的功能恢復提供必要的外部環(huán)境。藥物治療主要目的是通過藥物減輕或者抑制脊髓出現(xiàn)的各種繼發(fā)性損傷，促進神經(jīng)纖維或者神經(jīng)元軸突的再生和修復。 目前臨床上對于藥物治療急性脊髓損傷的研究較多，由于成熟的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(centralnervoussystem,CNS)固有的極其微弱的再生修復能力，導致目前臨床上治療脊髓損傷的藥物具有明確效果并不多。成熟的C

3、NS再生能力極其微弱主要與內外兩個因素有關：一是CNS神經(jīng)元自身缺乏足夠的再生能力；二是CNS再生的微環(huán)境中各種外源性、內源性生長抑制因子的影響。目前大部分人認為，CNS再生能力弱與外部微環(huán)境起主要作用。 脊髓損傷后的再生和修復目前在世界上仍然是脊髓損傷治療過程中難以解決的問題。目前的研究中，脊髓少突膠質細胞所分泌的Nogo-A蛋白是已知最強的神經(jīng)軸突生長抑制因子，對于受損神經(jīng)元再生具有極強的抑制作用。一些研究表明在急性脊髓損傷

4、的各個時期脊髓組織中Nogo-A的表達量具有明顯的差異，更有實驗研究表明通過抑制Nogo-A蛋白的表達有助于脊髓損傷的修復和再生。 研究目的 目前被公認為甲基強的松龍(methylprednisoloneMP)是對急性脊髓損傷有肯定療效的藥物，其對神經(jīng)元的損傷后保護及修復具有明顯的效果。既往許多多研究多認為MP的最主要的藥理作用是抑制過氧化和抗炎癥反應，而近年來很多實驗表明MP對神經(jīng)細胞蛋白質的表達具有一定的調節(jié)作用。但

5、甲基強的松龍能否影響Nogo-A的表達少有報道。本實驗通過建立急性大鼠脊髓損傷模型，早期尾靜脈靜注大劑量甲基強的松龍(methylprednisoloneMP)，于不同時間點采集受傷節(jié)段大鼠脊髓，通過HE染色和免疫組化染色觀察損傷后的脊髓組織Nogo-A的分布，測定其Nogo-A表達量并進行定量分析，同時觀察甲基強的松龍對Nogo-A表達是否有影響。 研究方法 本研究運用Allen's打擊方法，復制急性脊髓損傷大鼠模型，

6、將SD大鼠分為正常基礎對照組、急性脊髓損傷組(對照組)和急性脊髓損傷+大劑量MP組，損傷大鼠T8-T10節(jié)段，大劑量甲基強的松龍在損傷早期尾靜脈注射治療，分別在術后3、7、14天取受損節(jié)段大鼠脊髓，運用Western—blot方法測定各時間點Nogo-A表達量及其變化，觀察大劑量甲基強的松龍對Nogo-A表達是否有影響，同時通過HE染色，觀察大劑量甲基強的松龍治療急性脊髓損傷大鼠脊髓組織的形態(tài)學變化；通過免疫組化定性分析大劑量甲基強的松

7、龍治療急性脊髓損傷大鼠脊髓組織Nogo-A的表達變化。 研究結果 1.損傷組早期出現(xiàn)脊髓組織充血，脊髓組織神經(jīng)纖維逐漸壞死，損傷大鼠脊髓組織出現(xiàn)神經(jīng)纖維斷裂，消亡，脊髓組織呈空泡樣的變化明顯增加，少突膠質細胞核數(shù)量較正常組明顯減少。在正常組中Nogo-A免疫組化染色呈弱陽性，而在損傷后大鼠脊髓組織少突膠質細胞Nogo-A免疫組化染色呈陽性和強陽性，但是對照組和治療組差異不明顯。 2.在大鼠急性損傷脊髓組織中，No

8、go-A蛋白表達量明顯增加，其中7天＞14天＞3天，這與一些研究證實Nogo-A在急性脊髓損傷中呈逐漸升高，第7天達到高峰，然后逐漸降低是一致的。 3.在大劑量MP治療的大鼠急性損傷脊髓組織中各個時間點Nogo—A的表達量較對照組明顯降低，說明MP對于急性脊髓損傷大鼠脊髓中Nogo-A的表達有一定的抑制作用。 研究結論 1.通過免疫組化和HE染色能夠較好的觀察急性脊髓損傷后SD大鼠脊髓組織的病理變化，能夠定性分析