骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)誘導(dǎo)分化的類神經(jīng)細(xì)胞移植治療大鼠脊髓損傷.pdf

1、研究背景:
　　 中樞神經(jīng)的不可再生已經(jīng)成為共識(shí)，因此尋找其他可以修復(fù)或替代的方法成為當(dāng)下研究的熱點(diǎn)。在發(fā)達(dá)國家，脊髓損傷的發(fā)生率大約為13.3～45.9人/百萬人/年;據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，在中國每年大約新增一萬左右的脊髓損傷患者。在損失大量社會(huì)勞動(dòng)力的同時(shí)，醫(yī)療費(fèi)用支出也成為社會(huì)和家庭的巨大負(fù)擔(dān)。
　　 近年來，隨著細(xì)胞工程技術(shù)的發(fā)展，細(xì)胞移植治療脊髓損傷成為研究的熱點(diǎn)。神經(jīng)干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、嗅鞘細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等在修復(fù)脊髓

2、損傷方面取得了一定的療效，但是尚不能滿足我們的需要。尋找更好的種子細(xì)胞，成為治療脊髓損傷有可能取得重大突破的途徑之一。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)自發(fā)現(xiàn)以來，大量的試驗(yàn)充分證明其在體外向結(jié)締組織包括骨、軟骨、骨骼肌、脂肪、韌帶等方面的分化能力。Kopen等報(bào)道將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞注入新生鼠側(cè)腦室后，最終分化成為了神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞開始用于脊髓損傷的治療。但單純的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療脊髓損傷療效有限。Abouelfetou

3、h等人將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外與海馬組織薄片共培養(yǎng)，最終分化成為了神經(jīng)細(xì)胞。
　　 本實(shí)驗(yàn)采用生物誘導(dǎo)和化學(xué)誘導(dǎo)兩種方法，對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行定向誘導(dǎo)，最終使其分化為能夠表達(dá)神經(jīng)細(xì)胞特異性標(biāo)志的類神經(jīng)細(xì)胞，將誘導(dǎo)后的類神經(jīng)細(xì)胞移植入制備好的脊髓損傷的動(dòng)物模型中。通過對(duì)模型動(dòng)物肢體的運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況和脊髓切片組織學(xué)變化的觀察，研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞后，移植治療脊髓損傷的效果。該實(shí)驗(yàn)為臨床上采用骨髓間充質(zhì)干細(xì)

4、胞移植治療脊髓損傷提供理論依據(jù)。
　　 研究目的:
　　 通過對(duì)脊髓損傷模型大鼠的行為對(duì)比及生化指標(biāo)的檢測，研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為類神經(jīng)細(xì)胞后移植對(duì)脊髓損傷的療效。
　　 研究方法:
　　 取4W雄性Wistar大鼠骨髓分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，對(duì)第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分別進(jìn)行化學(xué)誘導(dǎo)和生物因子誘導(dǎo)后，收集備用。8W雄性Wistar大鼠48只，采用Allens打擊法建立大鼠的脊髓損傷模型，隨機(jī)分為

5、四組:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞組、化學(xué)誘導(dǎo)組、生物誘導(dǎo)組和DMEM培養(yǎng)液組，一周后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞組損傷部位局部注射第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，化學(xué)誘導(dǎo)組局部注射化學(xué)誘導(dǎo)成的神經(jīng)細(xì)胞，生物誘導(dǎo)組局部注射生物誘導(dǎo)成的神經(jīng)細(xì)胞，DMEM培養(yǎng)液組局部注射細(xì)胞培養(yǎng)液。對(duì)48只大鼠脊髓損傷模型分別于傷后1、2、3、4、6、8、10、12周進(jìn)行BBB評(píng)分，并于第12周末對(duì)損傷部位進(jìn)行取材做組織切片，觀察脊髓損傷的修復(fù)情況。
　　 研究結(jié)果:
　　

6、 模型建立后12周，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞組、化學(xué)誘導(dǎo)組和生物誘導(dǎo)組大鼠后肢功能恢復(fù)明顯優(yōu)于DMEM培養(yǎng)液組，且統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異(P＜0.05)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞組和化學(xué)誘導(dǎo)組功能恢復(fù)無明顯差別(P=0.4363)，生物誘導(dǎo)組恢復(fù)效果好于前兩組，且統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異(P＜0.05)。脊髓組織切片HE染色顯示骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞組和化學(xué)誘導(dǎo)組近似，脊髓膠質(zhì)細(xì)胞增生，神經(jīng)細(xì)胞崩解、空洞形成少于DMEM培養(yǎng)液組，生物誘導(dǎo)組神經(jīng)損傷修復(fù)效果最佳。