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文檔簡介
1、為了探討腹腔注射丙戊酸(VPA)輔佐骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)對大鼠脊髓損傷(SCI)后神經(jīng)功能恢復(fù)的作用。
本實驗選用3-4周齡健康雄性SD幼鼠,體外分離培養(yǎng)BMSCs,對第3代BMSCs進行流式細胞儀檢測,收集備用。把60只成年雄性SD大鼠隨機分為5組:假手術(shù)組(A組)、模型組(B組)、丙戊酸組(C組)、移植組(D組)和聯(lián)合組(E組)。動物脊髓損傷模型選用改良的Allen's法制作。丙戊酸組傷后給予腹腔注射VPA(30
2、0mg.kg-1),每12h給一次藥直至取材;移植組在損傷段脊髓注入BMSCs1mL濃度為1×106mL-1;聯(lián)合組同時注入VPA和BMSCs,假手術(shù)組和模型組注射等體積的0.9%氯化鈉。大鼠在傷后7d、14d先行后肢(BBB)運動功能評分,隨后處死取材。用蘇木精-伊紅染色法(HE)染色觀察脊髓空洞面積,用免疫組化法檢定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表達情況,通過脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TUNE
3、L)染色觀察脊髓組織切片神經(jīng)細胞凋亡情況。
實驗結(jié)果顯示,BBB評分:假手術(shù)組、模型組、丙戊酸組、移植組和聯(lián)合組在SCI后7d分別為(21),(2.22±0.33),(3.80±0.53),(3.81±0.83),(4.02±0.83);在SCI后14d分別為(21),(4.51±0.41),(7.25±0.95),(7.32±0.55),(9.76±0.95)。假手術(shù)組運動功能正常,3個治療組的BBB評分明顯比模型組高(P<
4、0.05)。在SCI后第14d聯(lián)合組的評分明顯高于丙戊酸組和移植組(P<0.05)。HE染色結(jié)果:模型組、丙戊酸組、移植組和聯(lián)合組損傷區(qū)域的面積分別是(4.57±0.26)mm2,(3.34±0.21)mm2,(3.51±0.18)mm2,(2.43±0.35)mm2。聯(lián)合組損傷空洞及瘢痕組織面積明顯比其余的3個組低(P<0.05)。免疫組化染色:假手術(shù)組、模型組、丙戊酸組、移植組和聯(lián)合組在SCI后7d的Caspase-3免疫組化陽性目
5、標(biāo)面密度分別為(1.51±0.23)%,(28.51±5.23)%,(24.39±4.65)%,(24.51±3.81)%,(20.73±3.43)%。在SCI后14d的Caspase-3免疫組化陽性目標(biāo)面密度分別為(1.64±0.41)%,(26.22±4.81)%,(21.21±4..04)%,(21.47±3.32)%,(16.15±3.09)%。假手術(shù)組少量caspase-3陽性表達,3個治療組的caspase-3表達明顯低于模
6、型組(P<0.05)。而聯(lián)合組的caspase-3陽性表達明顯低于丙戊酸組和移植組(P<0.05)。細胞凋亡結(jié)果:假手術(shù)組、模型組、丙戊酸組、移植組和聯(lián)合組在SCI后14d的凋亡指數(shù)分別為(4.18±0.39)%,(40.51±3.81)%,(19.95±2.04)%,(20.87±2.32)%,(12.83±1.09)%。傷后14d假手術(shù)組存在少量凋亡陽性細胞。與模型組相比,3個治療組的凋亡指數(shù)較低(P<0.05),而3個治療組之間,
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