聯(lián)合應用督脈電針與骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療大鼠全橫斷脊髓損傷的實驗研究.pdf

1、本研究旨在探討督脈電針能否促進脊髓全橫斷損傷處移植的骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)的存活、分化和遷移，以及聯(lián)合應用督脈電針與骨髓間充質(zhì)干細胞移植能否更好地促進大鼠脊髓受損傷的軸突再生和改善其后肢的活動功能，并分析其中可能的作用機制，為臨床上治療急性脊髓損傷提供新的治療策略和實驗依據(jù)。本研究分為以下二部分： (一)、電針督脈不同穴位對脊髓損傷處移植的骨髓間充質(zhì)干細胞遷移的影響 目的：探討電針不同督脈穴位對脊髓全橫斷損傷處移植

2、的骨髓間充質(zhì)干細胞遷移的影響。 方法：將成年SD大鼠分為MSCs移植組，督脈電針(百會穴GV20，大椎穴GV14，至陽穴GV9，脊中穴GV6)+MSCs移植組，督脈電針(至陽穴，脊中穴，腰俞穴GV2，長強穴GV1)+MSCs移植組。選取幼年雄性SD大鼠股骨全骨髓細胞，采用全骨髓培養(yǎng)法進行體外培養(yǎng)，通過不斷傳代對MSCs進行純化，取第3代細胞備用。上述3組大鼠脊髓T10段全橫斷手術(shù)后，在損傷處植入Hoechst33342標記的MS

3、Cs。接受督脈電針的兩組大鼠于術(shù)后7d，分別接受電針治療。所有實驗大鼠于術(shù)后30d取材，熒光顯微鏡下分別測量各組大鼠脊髓損傷處移植的MSCs向損傷處頭端和尾端組織遷移的距離。 結(jié)果：督脈電針(百會穴，大椎穴，至陽穴，脊中穴)+MSCs移植組，MSCs向脊髓損傷區(qū)頭端組織遷移的距離明顯長于MSCs移植組；督脈電針(至陽穴，脊中穴，腰俞穴，長強穴)+MSCs移植組，MSCs向脊髓損傷區(qū)尾端組織遷移的距離明顯長于MSCs移植組。

4、 結(jié)論：督脈電針能夠促進脊髓全橫斷損傷處移植的MSCs的遷移；電針不同督脈穴位對脊髓損傷處移植的MSCs的遷移有一定的影響。 (二)、聯(lián)合應用督脈電針與骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療大鼠全橫斷脊髓損傷的實驗研究 目的：探討督脈電針能否促進脊髓全橫損傷處移植的MSCs存活和分化，以及聯(lián)合應用督脈電針與骨髓間充質(zhì)干細胞移植能否更好地促進大鼠脊髓受損傷軸突的再生和改善其后肢的活動功能。 方法：將成年SD大鼠分為實驗對照組、

5、MSCs移植組、督脈電針組、督脈電針+MSCs移植組。建立大鼠全橫斷脊髓損傷的動物模型，需要進行細胞移植組的大鼠在脊髓全橫斷后立即向脊髓橫斷處移植MSCs，需要接受督脈電針治療組的大鼠在術(shù)后一周給予督脈電針(選取至陽穴，脊中穴，腰俞穴，長強穴4個穴位)治療，隔天一次，至術(shù)后30d。每周進行BBB評分和爬網(wǎng)格測試。術(shù)后14d，取大鼠脊髓橫斷處及前后節(jié)段脊髓檢測神經(jīng)營養(yǎng)素-3(NT-3)的分泌量。術(shù)后30d，進行灌注、取材，然后切片并進行免

6、疫熒光組織化學染色等形態(tài)學檢測。 結(jié)果：術(shù)后30d，在移植MSCs的兩組大鼠中，我們都能觀察到MSCs在脊髓損傷處的存活和分化，兩組相比，脊髓損傷處移植的MSCs的存活數(shù)目沒有差異。與MSCs移植組相比，督脈電針+MSCs移植組的MSCs分化為神經(jīng)元樣細胞及少突膠質(zhì)樣細胞的百分率明顯增高。與其它實驗組相比，督脈電針+MSCs移植組的大鼠脊髓損傷處及其頭、尾側(cè)脊髓節(jié)段NT-3水平最高，其次為督脈電針組。與其它實驗組相比，在督脈電針

7、+MSCs移植組的大鼠脊髓損傷處及其鄰近組織中，神經(jīng)絲蛋白-200(NF-200)、5-羥色胺(5-HT)和降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)陽性神經(jīng)纖維數(shù)量明顯增多；髓鞘堿性蛋白(MBP)陽性髓鞘結(jié)構(gòu)較為明顯；此外，大腦皮質(zhì)體感運動區(qū)內(nèi)錐體細胞層、中腦紅核和L1脊髓背核的受損傷神經(jīng)元存活數(shù)量明顯增高；癱瘓后肢后BBB評分值最高。 結(jié)論：督脈電針能夠促進大鼠脊髓損傷處及其鄰近組織分泌NT-3和促進移植的MSCs分化為神經(jīng)元樣細