骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞立體定向移植治療大鼠脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)立體定向移植對(duì)大鼠脊髓損傷后神經(jīng)功能恢復(fù)的影響，并探討其可能的治療機(jī)制，為脊髓損傷的臨床治療提供有價(jià)值的理論依據(jù)。
　　方法：采用密度梯度離心法結(jié)合貼壁篩選法體外分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，于移植前摻入10 mg/L的BrdU進(jìn)行標(biāo)記。將成年雌性Wistar大鼠以動(dòng)脈瘤夾閉法制備大鼠脊髓損傷模型后隨機(jī)分為對(duì)照組、生理鹽水組與移植組。移植組大鼠致傷后第7天，通過(guò)立體定向途徑移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞到脊髓損

2、傷中心，生理鹽水組以同樣方式給予等量生理鹽水，對(duì)照組大鼠不做處理。于大鼠脊髓損傷前及損傷后第7(移植前)，14，30，60，90天進(jìn)行BBB后肢功能評(píng)分和軀體感覺(jué)誘發(fā)電位(SEP)、運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位(MEP)檢測(cè)；損傷第90天處死大鼠，觀察其脊髓組織中有無(wú)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞、Brdu+神經(jīng)元特異性烯醇化酶、Brdu+膠質(zhì)纖維酸性蛋白、Brdu+堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、Brdu+腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子免疫組織化學(xué)雙染陽(yáng)性細(xì)胞。
　　結(jié)果：(1

3、)通過(guò)密度梯度離心法結(jié)合貼壁篩選法分離大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，在體外進(jìn)行傳代、擴(kuò)增。經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)證實(shí)分離所得細(xì)胞為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。(2)用動(dòng)脈瘤夾閉法制作大鼠脊髓損傷模型，損傷后第1天，所有大鼠BBB后肢功能評(píng)分為0分，運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位、體感誘發(fā)電位波型均消失，證實(shí)造模成功。(3)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植組大鼠BBB后肢功能評(píng)分恢復(fù)優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05)；生理鹽水組BBB評(píng)分在損傷后30 d內(nèi)恢復(fù)速度慢于對(duì)照組(P<0.05)，至第90

4、天與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。(4)自損傷后第30天開(kāi)始，細(xì)胞移植組大鼠運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位潛伏期及體感誘發(fā)電位P1波潛伏期的恢復(fù)均優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05)，并持續(xù)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。(5)在移植組大鼠脊髓損傷中心及頭、尾端距離脊髓損傷中心1cm處均可見(jiàn)BrdU染色陽(yáng)性細(xì)胞及Brdu+神經(jīng)元特異性烯醇化酶、Brdu+膠質(zhì)纖維酸性蛋白、Brdu+堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、Brdu+腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子免疫組織化學(xué)雙染陽(yáng)性細(xì)胞。
　　結(jié)論

5、：(1)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以在體外分離、培養(yǎng)及傳代。(2)MSCs骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)SCI大鼠的神經(jīng)功能的恢復(fù)，在行為學(xué)評(píng)分及運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位、感覺(jué)誘發(fā)電位檢測(cè)方面得到明顯改善。(3)其機(jī)制可能與移植的MSCs可以在SCI大鼠脊髓內(nèi)存活、遷移，并分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞、上調(diào)宿主神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF、bFGF的表達(dá)等機(jī)制有關(guān)。(4)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療SCI大鼠方法安全、有效，組織學(xué)檢查沒(méi)有腫瘤樣細(xì)胞及異常分化細(xì)胞存在。