硫酸軟骨素酶ABC對大鼠脊髓損傷后神經(jīng)功能恢復的實驗研究.pdf

1、背景： 脊髓損傷(SCI)后有非常高的致殘率。包括運動、感覺的喪失和慢性疼痛、肌肉僵直等體征。雖然有部分患者損傷后可出現(xiàn)自發(fā)恢復，但恢復非常有限，絕大部分患者會留下嚴重后遺癥。目前無有效方法來治療，臨床上各種治療措施結果均不樂觀。令人欣慰的是隨著研究深入，對脊髓損傷的損傷和恢復機制有了一定的了解，在實驗模型上，一部分治療已取得了令人鼓舞的結果。哺乳動物SCI后神經(jīng)元軸突僅有微弱的再生潛能，與神經(jīng)元本身的特點和胞外微環(huán)境中抑制因素

2、有關。各種神經(jīng)營養(yǎng)因子的應用雖能促進神經(jīng)元軸突再生修復，但SCI后微環(huán)境中大量存在的抑制因子的阻礙作用成為SCI修復未形成有效功能恢復的重要原因之一。研究認為SCI后由膠質(zhì)瘢痕分泌的硫酸軟骨素蛋白多糖(CSPGs)是軸突再生修復中的重要抑制因子。SCI后阻斷CSPGs作用，軸突表現(xiàn)出了較強的再生潛能并能促進神經(jīng)功能的恢復，但對SCI后星形膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元的作用研究較少，特別是對在體的研究。 目的： 本課題通過改良Alle

3、n方法建立大鼠脊髓損傷模型，于網(wǎng)膜下腔置管并經(jīng)導管注射ChABC抑制CSPGs。通過檢測脊髓損傷后各組不同時相點的運動誘發(fā)電位(MEP)、后肢運動功能(BBB評分)的改變，評價ChABC對脊髓損傷后運動功能恢復作用。檢測受損脊髓細胞凋亡相關蛋白的表達變化，初步觀察ChABC對脊髓損傷后神經(jīng)細胞凋亡的影響。免疫組化染色觀察ChABC對脊髓損傷后GFAP、NF200改變的影響，觀察對SCI后星形膠質(zhì)細胞和神經(jīng)細胞的影響，并初步探討CSPGs

4、抑制脊髓損傷后功能恢復的部分機制。 方法： 1．SD大鼠72只，體重250～300g，隨機分為假手術組(無損傷，不給藥)、對照組(損傷，給生理鹽水)、治療組(損傷，給ChABC)，分為4個時間點，即：術后1d、1w、2w、4w，均蛛網(wǎng)膜下給藥，n=24。以改良Allen法制作T<,10>脊髓損傷模型，致傷能量為35gcf，造成輕中度的脊髓損傷。 2．用改良的Yaksh法行蛛網(wǎng)膜下腔置管。假手術組只打開椎板，并置管

5、，不給藥；對照組和治療組分別在傷后即刻經(jīng)蛛網(wǎng)膜下腔導管注入等容積(6μl)生理鹽水、ChABC(1u/ml)，在傷后第二天開始每天給同量藥一次，1w后拔出導管。 3．分別在傷前、傷后1d、1w、2w、4w進行運動誘發(fā)電位(MEP)和BBB功能評分。 4．分別在傷后1d、1w、2w、4w處死各組大鼠，進行HE、尼氏(Nissl)染色及免疫組化GFAP、NF200和Bcl-2、Bax染色，觀察傷后脊髓組織形態(tài)和星形膠質(zhì)細胞、

6、膠質(zhì)瘢痕增生以及神經(jīng)細胞凋亡情況。免疫組化結果用生物醫(yī)學圖像分析儀行平均光密度(AOD)分析，分析結果進行方差分析、t檢驗統(tǒng)計比較。 結果： 1．應用改良Allen法成功構建大鼠脊髓挫傷模型，致傷力為35gcf，模型構建標準統(tǒng)一；順利進行蛛網(wǎng)膜下腔置管，并順利給藥1w。 2．所有動物。BBB評分在術前均為21分，假手術組傷后分值改變非常小，治療組和對照組在損傷后1d雙下肢全癱(BBB評分為O)，在傷后第2天開始逐

7、漸有自發(fā)恢復，但各組之間恢復的程度不同。治療組恢復快于對照組。假手術組大鼠MEP的N1潛伏期改變較小，治療組和對照組的潛伏期在術后1d時有明顯的延長，以后均有恢復，但治療組恢復優(yōu)于對照組。 3．NF200在假手術組著色淺，著色神經(jīng)元較少。治療組和對照組傷后著色神經(jīng)元數(shù)開始增多，但治療組明顯多于對照組。假手術組GFAP染色面積在1d、1w、2w和4w時無明顯變化。治療組和對照組GFAP面積傷后1d即開始增大，治療組要明顯小于對照組

8、。 4．術后假手術組Bax和Bcl-2蛋白均表達少，且各個時間點間改變不明顯。對照組和治療組中Bax蛋白傷后1d達高峰，1w后逐漸減弱；Bcl-2在對照組傷后1d時達高峰，治療組在1w時達高峰。對照組比治療組Bax蛋白表達明顯增多，而Bcl-2表達則明顯減少，差異顯著，并且持續(xù)時間短。 結論： 1．ChABC能促進鼠脊髓損傷后運動功能恢復 2．ChABC能增強大鼠脊髓損傷后組織神經(jīng)細胞的抗凋亡能力