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文檔簡介
1、目的
研究低分子硫酸軟骨素的制備方法,并探討其對軟骨的修復作用。
方法
1、稱取一定量分子質(zhì)量在5萬以上的硫酸軟骨素(ChS),在一定溫度和條件下分別用HCl、H2O2和硫酸軟骨素裂解酶EAC對其進行降解,反應結束后用乙醇沉淀、脫水、干燥,產(chǎn)物用高效液相色譜儀測定分子量。
2、建立新西蘭大白兔膝關節(jié)軟骨缺失模型,36只新西蘭大白兔隨機分成6組,分別為對照組[蒸餾水0.4g/(kg·d)]、模型組[
2、蒸餾水0.4g/(kg·d)]、低分子量ChS低劑量組[低分子硫酸軟骨素0.2g/(kg·d)]、低分子量ChS高劑量組[低分子硫酸軟骨素0.4g/(kg·d)]、高分子量ChS低劑量組[高分子硫酸軟骨素0.2g/(kg·d)]和高分子量ChS高劑量組[高分子硫酸軟骨素0.4g/(kg·d)],每組6只,分別進行灌胃給藥。記錄各組實驗用兔的體重、生存時間和生活狀況,對關節(jié)軟骨缺損部位修復情況和病理組織學切片進行觀察。應用ELISA法檢測
3、兔關節(jié)液中IL-1β、TNF-α和TGF-β的水平,并采用全自動生化分析儀及其配套的試劑盒對兔血清中鈣、磷含量進行測定。
結果
1、經(jīng)高效液相色譜法測定,硫酸軟骨素原料的分子量為55426。用HCl降解得到的ChS,分子量為3936,顏色從白色轉(zhuǎn)變成紅褐色,產(chǎn)物粘性較大,產(chǎn)率較低為48.71%;而用H2O2在酸性條件下和用硫酸軟骨素裂解酶EAC降解所得到的硫酸軟骨素,降解效果較好,分子量分別為4217和4565,其外
4、觀較好,產(chǎn)物為乳白色,其產(chǎn)率分別達到64.45%和91.6%。
2、造模后傷口愈合情況較好,實驗用兔生活狀態(tài)和精神狀態(tài)良好。造模后各組體重均有下降,但模型組與其余給予ChS組相比,體重下降明顯。低分子ChS組,其軟骨表面較為平整,凹陷基本已填充,較模型組與高分子ChS組效果明顯。在HE染色狀態(tài)下,損傷修復處均可見初期修復反應,并且給予低分子ChS組效果要優(yōu)于高分子ChS組和模型組。
3、低分子ChS和高分子ChS都能
5、夠減少關節(jié)液中炎性因子的含量和增加TGF-β的含量(P<0.05),且低分子ChS組與高分子ChS組相比,效果較好(P<0.05)。與模型組相比,給予ChS的組別,其血清中的鈣磷含量也相對較少(P<0.05)。
結論
1、HCl、H2O2和硫酸軟骨素裂解酶EAC都能有效地將分子量為5萬以上的ChS降解為分子量在3500-5300范圍內(nèi)的低分子量產(chǎn)物。
2、低分子ChS能夠更好地促進傷口愈合和軟骨修復,這可能
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