低分子硫酸軟骨素的制備及對(duì)軟骨修復(fù)作用的研究.pdf

1、目的
　　研究低分子硫酸軟骨素的制備方法，并探討其對(duì)軟骨的修復(fù)作用。
　　方法
　　1、稱取一定量分子質(zhì)量在5萬(wàn)以上的硫酸軟骨素(ChS)，在一定溫度和條件下分別用HCl、H2O2和硫酸軟骨素裂解酶EAC對(duì)其進(jìn)行降解，反應(yīng)結(jié)束后用乙醇沉淀、脫水、干燥，產(chǎn)物用高效液相色譜儀測(cè)定分子量。
　　2、建立新西蘭大白兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺失模型，36只新西蘭大白兔隨機(jī)分成6組，分別為對(duì)照組[蒸餾水0.4g/(kg·d)]、模型組[

2、蒸餾水0.4g/(kg·d)]、低分子量ChS低劑量組[低分子硫酸軟骨素0.2g/(kg·d)]、低分子量ChS高劑量組[低分子硫酸軟骨素0.4g/(kg·d)]、高分子量ChS低劑量組[高分子硫酸軟骨素0.2g/(kg·d)]和高分子量ChS高劑量組[高分子硫酸軟骨素0.4g/(kg·d)]，每組6只，分別進(jìn)行灌胃給藥。記錄各組實(shí)驗(yàn)用兔的體重、生存時(shí)間和生活狀況，對(duì)關(guān)節(jié)軟骨缺損部位修復(fù)情況和病理組織學(xué)切片進(jìn)行觀察。應(yīng)用ELISA法檢測(cè)

3、兔關(guān)節(jié)液中IL-1β、TNF-α和TGF-β的水平，并采用全自動(dòng)生化分析儀及其配套的試劑盒對(duì)兔血清中鈣、磷含量進(jìn)行測(cè)定。
　　結(jié)果
　　1、經(jīng)高效液相色譜法測(cè)定，硫酸軟骨素原料的分子量為55426。用HCl降解得到的ChS，分子量為3936，顏色從白色轉(zhuǎn)變成紅褐色，產(chǎn)物粘性較大，產(chǎn)率較低為48.71％;而用H2O2在酸性條件下和用硫酸軟骨素裂解酶EAC降解所得到的硫酸軟骨素，降解效果較好，分子量分別為4217和4565，其外

4、觀較好，產(chǎn)物為乳白色，其產(chǎn)率分別達(dá)到64.45％和91.6％。
　　2、造模后傷口愈合情況較好，實(shí)驗(yàn)用兔生活狀態(tài)和精神狀態(tài)良好。造模后各組體重均有下降，但模型組與其余給予ChS組相比，體重下降明顯。低分子ChS組，其軟骨表面較為平整，凹陷基本已填充，較模型組與高分子ChS組效果明顯。在HE染色狀態(tài)下，損傷修復(fù)處均可見(jiàn)初期修復(fù)反應(yīng)，并且給予低分子ChS組效果要優(yōu)于高分子ChS組和模型組。
　　3、低分子ChS和高分子ChS都能

5、夠減少關(guān)節(jié)液中炎性因子的含量和增加TGF-β的含量(P＜0.05)，且低分子ChS組與高分子ChS組相比，效果較好(P＜0.05)。與模型組相比，給予ChS的組別，其血清中的鈣磷含量也相對(duì)較少(P＜0.05)。
　　結(jié)論
　　1、HCl、H2O2和硫酸軟骨素裂解酶EAC都能有效地將分子量為5萬(wàn)以上的ChS降解為分子量在3500-5300范圍內(nèi)的低分子量產(chǎn)物。
　　2、低分子ChS能夠更好地促進(jìn)傷口愈合和軟骨修復(fù)，這可能