魷魚軟骨中硫酸軟骨素的提取、純化及降血脂活性的研究.pdf

1、魷魚是常見的海洋頭足類生物，資源十分豐富。我國是捕撈和加工魷魚的主要國家之一，在魷魚的加工過程中，魷魚軟骨等加工副產(chǎn)物常被作為下腳料丟棄，未能得到充分利用，造成資源的極大浪費(fèi)。本文以魷魚軟骨為研究對象，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上對堿提、酶解工藝進(jìn)行優(yōu)化，獲得最佳提取工藝條件，通過純化工藝的探討，制得高純度的硫酸軟骨素，并對其降血脂活性進(jìn)行了研究，獲得了相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，為今后魷魚軟骨的綜合利用提供了參考依據(jù)。本論文主要研究內(nèi)容如下：
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2、、通過單因素及響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化料液比、NaOH濃度、浸提溫度、浸提時間等影響硫酸軟骨素浸出效果的因素條件，依據(jù)二次回歸模型，確定了最佳浸提工藝條件為料液比1:8（W/V）、NaOH濃度3％、浸提溫度50℃、浸提時間5.3 h。經(jīng)驗(yàn)證，在該條件下硫酸軟骨素得率為62.89%，與試驗(yàn)預(yù)測值基本吻合。
　　2、在參考文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定木瓜蛋白酶為實(shí)驗(yàn)用酶，并進(jìn)行單因素試驗(yàn)，對影響木瓜蛋白酶酶解工藝的幾個關(guān)鍵因素進(jìn)行了考察。在此基

3、礎(chǔ)上，采用正交組合設(shè)計(jì)試驗(yàn)進(jìn)一步優(yōu)化，得出影響魷魚軟骨酶解效果的主要因素依次為：pH、酶解溫度和酶解時間；最佳酶解工藝條件為酶添加量2%、pH6.5、酶解溫度60℃、酶解時間5 h。在此條件下進(jìn)行酶解工藝的驗(yàn)證性試驗(yàn)，測得產(chǎn)物中蛋白質(zhì)含量為4.97%，硫酸軟骨素含量為70.11%。
　　3、采用乙醇沉淀法和DEAE-52柱層析法純化硫酸軟骨素。乙醇沉淀法以硫酸軟骨素、葡萄糖醛酸含量等兩個指標(biāo)來評價(jià)純化效果，確定了最佳醇沉條件為：N

4、aCl濃度4%、pH6.5、醇沉體系乙醇濃度70%、固形物濃度20%。在此條件下進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，所得純化產(chǎn)物中硫酸軟骨素含量為91.28%，葡萄糖醛酸含量為41.03%。DEAE-52柱層析法是通過硫酸咔唑法隔管跟蹤檢測得到洗脫峰，洗脫結(jié)果表明分離成分較為單一，分離效果較好。收集洗脫峰，經(jīng)透析、冷凍干燥后獲得硫酸軟骨素純品，所得純化產(chǎn)物中硫酸軟骨素含量為93.16%，葡萄糖醛酸含量為42.73%。對兩種純化方法所制得的硫酸軟骨素純品進(jìn)行紫

5、外光譜、紅外光譜掃描，發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)中不含（或含微量）核酸、蛋白質(zhì)，分子中存在乙酰氨基、游離糖醛酸、硫酸根等基團(tuán)，與硫酸軟骨素標(biāo)準(zhǔn)品基本一致。
　　4、利用高膽固醇血癥小鼠模型研究魷魚軟骨硫酸軟骨素的降血脂作用，并通過檢測部分抗氧化指標(biāo)，探究抗氧化作用對降血脂功能的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，硫酸軟骨素可在一定程度上控制小鼠體重增長，降低小鼠肝臟指數(shù)、動脈粥樣硬化指數(shù)及冠心病指數(shù)，同時升高腎臟指數(shù)；可有效調(diào)節(jié)小鼠血清中TC、TG、LDL-C水平，升