大鼠脊髓損傷后自噬的變化及EGCG對其影響的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討脊髓損傷后不同的時間、空間范圍內神經細胞自噬的表達及表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-Gallate,EGCG)對其的影響機制。
  方法:鉗夾法建立大鼠脊髓損傷模型,實驗動物分為假手術組(n=40),脊髓損傷組(n=40),EGCG組(n=40)(分為運動功能測定部分和制備切片部分),用斜板實驗和BBB評分方法觀察大鼠SCI后不同時間(1 d,3d,1 w,2 w,3 w,4 w(n=5)

2、),運動功能變化及EGCG對其運動功能的影響;用連續(xù)切片、結晶紫染色(CV)、平面計數(shù)方法確定SCI中心,用免疫組織化學和免疫熒光方法觀察SCI后不同時間(6 h,12 h,1 d,3d,7 d(n=5))、從損傷中心到頭端不同距離(0.05~4.55 mm),神經細胞自噬相關蛋白Beclin-1和LC-3表達的時間、空間分布規(guī)律及EGCG對其影響。
  結果:脊髓損傷術后1 d-4w,經斜板試驗證實,脊髓損傷組大鼠相對于假手術組

3、斜板角度在各個時間點明顯減小,運動功能明顯降低(P<0.05);EGCG組相對于脊髓損傷組,斜板角度在各個時間點明顯增加(P<0.05),除外1d和3d,均有統(tǒng)計學意義。BBB評分結果顯示,脊髓損傷術后1 d~4w,脊髓損傷組大鼠相對于假手術組獲得了更低的評分,運動功能明顯降低(P<0.05);EGCG組相對于SCI組,大鼠各個時間點運動功能明顯改善(P<0.05)除1d外均有統(tǒng)計學意義。CV染色結果顯示,在SCI后6h~7d時間內,在

4、損傷中心處無神經細胞存活,從損傷中心往頭端方向觀察發(fā)現(xiàn),隨著距離的增加,在0.05~4.55 mm空間范圍內,SCI組存活神經元數(shù)增加;EGCG組與SCI組相比,在相同的時間點和空間距離處,存活的神經元數(shù)明顯增加(P<0.05)。免疫組織化學結果顯示,自噬相關蛋白LC3在SCI后6h~7d時間內,假手術組不表達或微量表達,SCI組LC3蛋白表達的神經元細胞數(shù)與假手術組在相同時間、相同距離處比較明顯增加(P<0.05); EGCG組與SC

5、I組相比較,LC3陽性表達神經元數(shù)明顯增加(P<0.05),SCI后6h出現(xiàn)LC3陽性表達神經元細胞,3d時陽性細胞表達達高峰,持續(xù)表達7 d;自噬相關蛋白Beclin-1免疫組化檢測結果:Beclin-1在SCI后6h~7d時間內,假手術組不表達或微量表達,SCI組beclin-1蛋白表達的神經元細胞數(shù)與假手術組在相同時間、相同距離處比較明顯增加(P<0.05);EGCG組與SCI組相比較,Beclin-1陽性表達神經元數(shù)明顯增加(P

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