自噬在急性期脊髓損傷大鼠膀胱平滑肌表達(dá)的實(shí)驗研究.pdf

1、研究背景:
　　脊髓損傷(Spinal cord injury, SCI)是一種可造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重度創(chuàng)傷并可引起多種并發(fā)癥的疾病，脊髓損傷后其中常見的并發(fā)癥之一即是神經(jīng)源性膀胱。因為低級的排尿中樞存在于脊髓腰骶段，所以當(dāng)損傷腰骶或以上時就會出現(xiàn)排尿障礙，表現(xiàn)為膀胱逼尿肌過度活動癥、膀胱逼尿肌收縮無力或者逼尿肌與尿道括約肌協(xié)同失調(diào)等，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。已有研究證實(shí)自噬在大鼠脊髓損傷模型中脊髓損傷處活躍，其參與神經(jīng)損傷修復(fù)，促

2、進(jìn)自噬表達(dá)也有助于恢復(fù)小鼠后肢的運(yùn)動功能，此外，在氣管平滑肌、心肌及血管平滑肌中已證實(shí)自噬現(xiàn)象存在，其異常表達(dá)的水平，在慢性阻塞性肺部疾病、心臟疾病及動脈粥樣硬化形成過程中發(fā)揮作用。
　　自噬是一種選擇性降解胞質(zhì)蛋白、蛋白堆積物及細(xì)胞器的胞內(nèi)代謝機(jī)制，首先形成自噬小體，然后運(yùn)至溶酶體并與其融合形成自噬溶酶體，最終由自噬溶酶體降解胞質(zhì)成分。
　　目的:
　　觀察自噬相關(guān)基因、蛋白在急性期脊髓損傷后大鼠膀胱平滑肌組織的表達(dá)

3、，以探討其在神經(jīng)源性膀胱發(fā)病機(jī)制可能存在作用。
　　方法:
　　24只雄性成年Wistar大鼠隨機(jī)分為兩組即模型組（12只）和對照組（12只）。模型組應(yīng)用改良Allens’法構(gòu)造急性期脊髓損傷模型，對照組僅予以椎板切除術(shù)。術(shù)后6h對大鼠下肢運(yùn)動功能進(jìn)行BBB(Basso Beattle Bresnahan)運(yùn)動評分，尼氏染色觀察兩組大鼠脊髓橫斷面形態(tài)學(xué)變化，Western blotting檢測膀胱平滑肌細(xì)胞微管相關(guān)蛋白1輕鏈

4、3(microtubule associated protein1 light chain3，LC3)和P62蛋白相對表達(dá)量，免疫熒光染色法檢測LC3和P62蛋白在平滑肌細(xì)胞位置及陽性細(xì)胞率，RT-PCR檢測膀胱平滑肌細(xì)胞中基因LC3、P62、Beclin1 mRNA相對水平。
　　結(jié)果:
　　1.術(shù)后6h模型組大鼠下肢運(yùn)動功能BBB評分較對照組低(P＜0.01)
　　2.尼氏染色觀察鏡下觀察對照組脊髓灰質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞尼

5、氏小體結(jié)構(gòu)完整，神經(jīng)元胞體呈多角形，模型組可觀察到損傷處脊髓橫斷面神經(jīng)元數(shù)量減少，胞體腫脹變?yōu)閳A形，尼氏小體減少。
　　3.Western blotting提示模型組膀胱平滑肌細(xì)胞蛋白LC3-Ⅱ表達(dá)比對照組平滑肌細(xì)胞蛋白高(P＜0.05），模型組膀胱平滑肌細(xì)胞蛋白P62表達(dá)比對照組膀胱平滑肌細(xì)胞蛋白降低(P＜0.05）。
　　4.免疫熒光染色法提示LC3蛋白位于膀胱平滑肌細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，陽性細(xì)胞率比對照組高(P＜0.05），P62