HSP70在急性脊髓損傷后的表達及GGA修復(fù)急性脊髓損傷的實驗研究.pdf

1、目的：探討急性脊髓損傷后熱休克蛋白70（heat shock prtein70，HSP70）表達的變化規(guī)律；通過誘導(dǎo)急性脊髓損傷后早期HSP70的大量表達，探討其誘導(dǎo)劑替普瑞酮（Geranylgeranylacetone，GGA）修復(fù)脊髓損傷的療效，綜合、客觀評價脊髓功能恢復(fù)程度，從而尋求一種簡單有效、可應(yīng)用于臨床的新方法，為臨床治療脊髓損傷提供實驗學(xué)依據(jù)。 方法： 1、急性脊髓損傷后HSP70表達的變化。健康成年雌性W

2、istar大鼠50只，隨機分為Ⅰ假手術(shù)組：單純顯露T10節(jié)段脊髓，不予打擊損傷；Ⅱ損傷組：顯露T10節(jié)段脊髓，使用MASCIS Impactor ModelⅡ脊髓損傷打擊器打擊脊髓（10g×25mm），建立急性脊髓損傷模型。分別于術(shù)后6、12、24、48、72小時，每組隨機選取5只動物，取材、固定、切片，行HSP70免疫組織化學(xué)染色，觀察HSP70表達變化情況。 2、GGA對急性脊髓損傷后HSP70表達、神經(jīng)細胞凋亡及神經(jīng)功能恢

3、復(fù)的影響。健康成年雌性Wistar大鼠75只，隨機分為3組，各25只。Ⅰ對照組：損傷前24小時、損傷后半小時以及損傷后的每24小時至傷后1周分別經(jīng)胃管給予等量生理鹽水；Ⅱ損傷后給藥組：損傷前24小時經(jīng)胃管給予等量生理鹽水，損傷后半小時以及損傷后的每24小時至傷后1周均經(jīng)胃管給予GGA（溶于生理鹽水）600mg/kg；Ⅲ損傷前、后聯(lián)合給藥組：各時間點分別經(jīng)胃管給予GGA（溶于生理鹽水）600mg/kg。所有動物均手術(shù)顯露T10節(jié)段脊髓，使

4、用MASCIS Impactor ModelⅡ脊髓損傷打擊器打擊脊髓（10g×25mm），建立急性脊髓損傷模型。免疫組織化學(xué)染色測定HSP70的表達情況，TUNEL法檢測神經(jīng)細胞凋亡情況，HE染色光學(xué)顯微鏡觀察脊髓組織形態(tài)學(xué)改變，BBB評分法進行行為學(xué)功能評價。 結(jié)果： 1、急性脊髓損傷后HSP70表達水平迅速上升，至傷后24h達到高峰，之后轉(zhuǎn)為下降，至傷后72h脊髓組織內(nèi)已少見HSP70陽性細胞；而假手術(shù)組僅有低水平、

5、短時間的HSP70表達。 2、各組術(shù)后12、24、48、72小時HSP70表達水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ANOVA，P<0．05），Ⅲ組、Ⅱ組均大于Ⅰ組。各組術(shù)后12、24、48、72小時損傷部位細胞凋亡水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ANOVA，P<0．05），Ⅲ組、Ⅱ組均小于Ⅰ組。所有大鼠在脊髓損傷后出現(xiàn)雙下肢截癱，BBB評分組間比較，損傷后7天至傷后28天，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ANOVA，P<0．05），Ⅲ組、Ⅱ組評分大于Ⅰ組。