大鼠急性脊髓損傷后自噬的變化和意義.pdf

1、目的：研究大鼠急性脊髓損傷后自噬(autophagy)的激活情況及其表達(dá)的時(shí)程變化，探討自噬這一細(xì)胞行為在急性脊髓損傷過(guò)程中的作用，以期為脊髓損傷的治療提供新策略和新靶點(diǎn)。 方法：健康Wistar大鼠，雄性，體重250±20g，取20只隨機(jī)分為正常對(duì)照組和損傷組用于透射電鏡檢測(cè)，另取50只隨機(jī)分為正常對(duì)照組和損傷2h組、6h組、24h組、48h組用于Western blot檢測(cè)。各大鼠均采用改良的Allen's法制備大鼠急性脊髓

2、損傷模型，透射電鏡觀察比較正常對(duì)照組和損傷組相應(yīng)區(qū)域脊髓組織超微結(jié)構(gòu)，檢測(cè)自噬體(autophagosome)形成情況，免疫印跡法檢測(cè)正常對(duì)照組和損傷2h、6h、24h、48h組相應(yīng)區(qū)域脊髓組織自噬相關(guān)蛋白LC3(微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(microtubule associated protein1 light chain3，MAP1—LC3》的表達(dá)情況。 結(jié)果：透射電鏡下，大鼠正常對(duì)照組和損傷組超微結(jié)構(gòu)圖像顯示：正常對(duì)照組大鼠脊

3、髓組織神經(jīng)元核膜完整、核型規(guī)則，胞質(zhì)中線粒體形態(tài)分布及數(shù)目正常，未見(jiàn)自噬小體，溶酶體數(shù)目未見(jiàn)增多；損傷組損傷區(qū)神經(jīng)元，細(xì)胞核形不規(guī)則，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹，溶酶體數(shù)目增多，神經(jīng)元胞突與軸突均可見(jiàn)自噬小體，并可見(jiàn)線粒體腫脹；Western blot結(jié)果顯示：正常對(duì)照組LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值較低，SCI后2hLC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值較對(duì)照組即有明顯增加(P<0.05)，SCI后6h LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值達(dá)到峰值(P<0.01)，持續(xù)至48h