雌二醇抑制自噬促進大鼠脊髓損傷后運動恢復.pdf

1、背景與目的:
　　雌二醇在不同的中樞神經(jīng)病變中已經(jīng)證實具有神經(jīng)保護作用。在脊髓損傷中，雌激素具體的神經(jīng)保護作用機制尚未明確。先前的研究報道自噬在神經(jīng)損傷過程中起著重要的作用。本課題擬:1）動脈夾夾閉法建立大鼠嚴重脊髓損傷模型，觀察大鼠脊髓損傷后損傷組織自噬相關蛋白表達變化;2）高劑量雌二醇干預治療脊髓損傷后，運動功能是否改善3）觀察自噬指標在雌二醇干預脊髓損傷急性期中的變化4）離體實驗采用PC12細胞研究雌二醇的神經(jīng)保護作用。

2、r>　　方法:
　　取120只雌性SD大鼠，體重為200-220g。所有大鼠均行雙側卵巢摘除術，術后一半在處死之前隔天給予苯甲酸雌二醇肌肉注射，一半肌注大豆油作為對照。卵巢摘除術后1周采用夾閉法建立嚴重大鼠脊髓損傷模型。假手術組僅暴露椎板，不對脊髓做夾閉損傷。大鼠隨機分成4組，每組30只:第一組:Sham-vehicle組，即假手術未肌注苯甲酸雌二醇組;第二組:Sham-E2組，即假手術肌注苯甲酸雌二醇組;第三組:SCI-vehi

3、cle組，即脊髓損傷未肌注苯甲酸雌二醇組;第四組:SCI-E2組，即脊髓損傷肌注苯甲酸雌二醇組。為比較高劑量雌二醇的療效，脊髓損傷后7天，14天，21天，28天采用BBB評分和斜板試驗評估大鼠運動功能;損傷后28天HE染色觀察損傷脊髓病理形態(tài);尼氏染色觀察運動神經(jīng)元恢復情況。實時熒光定量PCR和蛋白印記檢測脊髓損傷后3天自噬相關蛋白如LC3、Beclin-1的表達變化。免疫組化法檢測損傷后1天，3天，7天LC3在運動神經(jīng)元中的免疫活性。

4、離體實驗采用PC12細胞觀察雌二醇對雷帕霉素（自噬敏化劑）的作用。
　　結果:
　　1.高劑量雌二醇明顯改善大鼠脊髓損傷后運動功能的恢復，損傷后14天，21天，28天各時間點對應的BBB評分及最大傾斜角度均較SCI-vehicle組高;
　　2.HE染色結果顯示，與SCI-vehicle組相比，給予雌二醇明顯減少組織壞死及缺損范圍。
　　3.Nissl染色顯示SCI-E2組較SCI-vehicle組明顯保留了脊髓

5、中的運動神經(jīng)元;
　　4.脊髓損傷術后3天，SCI-vehicle組的LC3、Beclin-1表達高于sham-vehicle組，雌二醇干預治療在mRNA和蛋白水平上抑制其表達;
　　5.免疫組化結果顯示在SCI-vehicle組，運動神經(jīng)元胞漿中LC3免疫反應性在3天時達高峰，在損傷后7天仍有較高水平的表達。損傷后3天，SCI-E2組運動神經(jīng)元中LC3的免疫反應性低于SCI-vehicle組和并在術后7天保持在一個較低水平

6、;
　　6.脊髓損傷3天后自噬底物SQSTM1在SCI-vehicle組較Sham-vehicle組相比有明顯降低。然而，給予雌二醇治療后，SQSTM1表達顯著增加;
　　7.在PC12細胞模型中，雌二醇預處理能降低雷帕霉素誘導的自噬活性并提高細胞的活力。
　　結論:
　　雌二醇在脊髓損傷過程中的神經(jīng)保護效應在一定程度上與抑制過度自噬相關。其作用機制很可能通過修飾GREP1-PI3K/AKT-mTOR的信號通路來