黃芪多糖促進脊髓損傷大鼠運動功能恢復的實驗研究.pdf

1、目的：本實驗主要觀察黃芪多糖(Astragalus Polysaccharide；APS）對脊髓損傷（Spinal Cord Injury；SCI）大鼠運動功能恢復及組織病理變化的影響，并進一步檢測黃芪多糖對脊髓損傷大鼠 GAP-43（Growth-associated protein-43）及MAP2（Microtubule-associated protein2）蛋白表達的影響，闡明其治療脊髓損傷的作用機制及靶點，從而明確黃芪多糖對

2、脊髓損傷的治療作用。
　　方法：
　　1.黃芪多糖對大鼠脊髓損傷后運動功能障礙和脊髓病理損害的修復作用
　　70只成年Sprague-Dawley大鼠，體重200-220g，隨機分為正常組（n=10）、損傷組（n=30）和黃芪多糖治療組（n=30），損傷組和黃芪多糖治療組內(nèi)部再分為7d、14d、28d三個亞組。損傷組和治療組均采用Allen打擊法(10g×25mm)制備大鼠T10脊髓損傷模型。造模成功后，治療組于術(shù)后腹

3、腔注射黃芪多糖注射液（Sigma公司）10mg/Kg，每天一次，持續(xù)至取材為止。術(shù)后7d、14d、28d，各亞組分別行BBB評分，HE染色觀察組織大體結(jié)構(gòu)和細胞形態(tài)，Nissl染色觀察尼氏小體的變化情況，鉻花氰染色觀察髓鞘改變情況。
　　2.黃芪多糖對大鼠脊髓損傷后GAP-43及MAP2表達的作用研究
　　采用免疫熒光和western blot檢測脊髓損傷大鼠GAP-43和MAP2蛋白表達情況，檢測APS治療脊髓損傷的作用機

4、制及治療靶點，明確黃芪多糖對脊髓損傷治療作用的分子機制。
　　結(jié)果：
　　1.術(shù)后各時間點，治療組BBB評分均高于損傷組，且有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。損傷組大鼠在7d、14d損傷脊髓組織主要表現(xiàn)為溶解、壞死形成為主，并伴隨組織空洞開始形成；28d時空洞基本形成，空洞周圍有致密瘢痕。治療組各時間點損傷脊髓組織壞死較輕，14d、28d時空洞面積縮小。損傷組術(shù)后7d白質(zhì)出現(xiàn)明顯脫髓鞘改變，并隨著損傷后時間延長而逐漸加重；術(shù)后2

5、8d，損傷周圍組織出現(xiàn)空泡狀改變。治療組各時間點脫髓鞘及髓鞘排列紊亂情況有所改善。損傷組術(shù)后7d尼氏小體開始聚集，14d時聚集加重，28d時幾乎完全崩解。治療組大鼠各時間點尼氏小體損害程度較輕。
　　2.免疫熒光和western blot檢測顯示，在正常大鼠脊髓中，GAP-43大量表達于脊髓灰質(zhì)中，而脊髓白質(zhì)中未見表達。在脊髓打擊損傷后，GAP-43于脊髓灰質(zhì)中表達開始下降，并隨著損傷后時間延長而下降明顯；在28d時表達最低；AP

6、S治療組GAP-43表達趨勢與損傷組一樣，但在相同時間相點，GAP-43表達與損傷組相比有所增高，且有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。MAP2在正常組中主要在灰質(zhì)中表達，未見在白質(zhì)中表達；損傷后7d，MAP2表達開始下降，隨損傷時間延長，表達逐漸減少；APS干預(yù)后，MAP2表達也呈現(xiàn)降低趨勢。與損傷組相比，表達量明顯增高，且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：APS能減輕脊髓損傷后組織病理損害，促進運動功能改善。其作用的可能