人工合成多肽FGL和IKVAV促進(jìn)損傷脊髓功能恢復(fù)的實驗研究.pdf

1、目的：通過體外和體內(nèi)兩種方式探討多肽FGL和IKVAV對脊髓損傷后恢復(fù)的影響。
　　 方法：設(shè)計并人工合成FGL和IKVAV多肽和對照肽。1.①培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞模型PC-12細(xì)胞，分為對照組和實驗組，實驗組中加入FGL，多肽溶液。對照組預(yù)先用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)板。分別于培養(yǎng)1、3、5、7、9d后采用細(xì)胞增殖檢測CCK-8法檢測兩組細(xì)胞增殖情況。②取PC-12細(xì)胞。分為三組，正常對照組不作處理，損傷對照組加入H2O2刺激16h。實驗組

2、先加入FGL多肽預(yù)孵育30 min，再加H2O2刺激16 h。流式細(xì)胞儀檢測兩組細(xì)胞凋亡情況；熒光定量PCR法檢測PC-12中的核因子NF-κ B mRNA。2.培養(yǎng)星形性膠質(zhì)細(xì)胞，將細(xì)胞分為對照組和實驗組。對照組正常培養(yǎng)，實驗組加入IKVAV人工合成多肽，檢測兩組細(xì)胞存活情況。②制作細(xì)胞劃傷模型，分為正常組、對照組、實驗組，正常組不作任何處理，對照組做劃傷處理，實驗組加入IKVAV培養(yǎng)一天后，制作劃傷模型，三天后提取各組細(xì)胞mRNA，

3、熒光定量PCR檢測GDNFmRNA表達(dá)變化。3.將45只大鼠隨機分成三組，A組為假手術(shù)組，B組為多肽FGL和IKVAV對照肽組，C組為多肽FGL和IKVAV干預(yù)組，采用原位雜交和Western blotting免疫印跡分析脊髓損傷后硫酸軟骨素蛋白多糖(CSPGS)NG2的表達(dá)；采用BBB評分法對大鼠癱瘓后肢進(jìn)行運動功能評估。
　　 結(jié)果：1.實驗組培養(yǎng)1、3、5、7、9d PC-12增殖數(shù)量均高于對照組。H2O2處理后，實驗組P

4、C-12凋亡數(shù)量及其中NF-κ B mRNA的表達(dá)量均低于對照組。2.IKVAV多肽組可存活率達(dá)95％以上，實驗組和對照組細(xì)胞活性沒有明顯差異，在劃傷實驗中，實驗組細(xì)胞GDNF表達(dá)明顯高于對照。3.原位雜交和Western blotting結(jié)果顯示假A組CSPGS NG2表達(dá)較弱，B組CSPGS NG2顯著增多，C組給予多肽FGL干預(yù)后CSPGs NG2表達(dá)明顯減弱，Western blotting結(jié)果驗證了癱瘓后肢運動明顯改善(均P<