人工合成TREM-1多肽對膿胸大鼠炎癥反應(yīng)的干預(yù)效應(yīng).pdf

1、目的:髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(Triggeringreceptorexpressedonmyeloidcells-1，TREM-1)是一種存在于人及嚙齒類動物的多形核中性粒細(xì)胞及成熟單核的細(xì)胞表面分子。在微生物成分存在的情況下，TREM-1的活化可放大炎癥反應(yīng)，并可引起敗血癥及肺炎初期的過度反應(yīng)。本次研究的目的是探討用TREM-1細(xì)胞外部分的人工合成多肽類似物對化膿性胸膜炎的大鼠炎癥反應(yīng)的干預(yù)效應(yīng)。 方法:對雄性Wistar大鼠進(jìn)

2、行胸腔穿刺注射銅綠假單胞菌(PAO1strain)與金黃色葡萄球菌(ATCC25923)，建立化膿性胸膜炎的大鼠模型，對其行隨機分組進(jìn)行或不進(jìn)行TREM-1源性的合成多肽類似物干預(yù)，然后分別在注射后6h、12h、18h、24h采集大鼠胸水、血清、胸膜標(biāo)本進(jìn)行研究，并觀察各組8天生存率情況。將大鼠隨機分為：(1)單純膿胸組(n=24)，單純胸穿注射銅綠假單胞菌與金黃色葡萄球菌混合懸液；(2)對照組(n=44)，在胸穿注入對照多肽1mL溶液

3、(1mg/mL)后馬上注射銅綠假單胞菌與金黃色葡萄球菌混合懸液；(3)LP17組(n=44)在胸穿注入LP17多肽1mL溶液(1mg/mL)后馬上注射銅綠假單胞菌與金黃色葡萄球菌混合懸液；(4)空白組(n=20)，我們分別在胸穿后第6h、12h、18h、24h4個時間點分批處死大鼠(單純膿胸組[n=24]、對照組[n=24]和LP17組[n=24]，每組每個時間點處死6例)。處死后開胸收集胸水及胸膜組織病理標(biāo)本，并進(jìn)行胸水細(xì)胞計數(shù)，胸水

4、及血清標(biāo)本的TNF-α、IL-1β、IL-6濃度測定。剩下對照組(n=20)、LP17組(n=20)和空白組(n=20)用于8天內(nèi)生存率測定。使用細(xì)胞計數(shù)板測出總胸水細(xì)胞數(shù)。胸水細(xì)胞涂片予瑞氏染色，并根據(jù)細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行手工細(xì)胞分類。用ELISA法進(jìn)行血清與胸水中IL-1β的濃度測定。將胸水細(xì)胞用CD11b/CD18單克隆抗體或空白對照抗體標(biāo)記后，使用流式細(xì)胞術(shù)測定胸水細(xì)胞表面的CR3(CD11b/CD18)的表達(dá)。將臟層、壁層胸膜標(biāo)本使用

5、HE染色進(jìn)行組織病理學(xué)分析。 結(jié)果:與對照組和單純膿胸組相比，LP17組在時間點18h和24h可降低總胸水細(xì)胞數(shù)和中性粒細(xì)胞數(shù)(P<0.05)。在時間點18h、24h，LP17的胸水IL-1β濃度低于對照組、單純膿胸組(P<0.05)。但LP17不影響胸水細(xì)胞的比例，及中性粒細(xì)胞的CR3(CD11b/CD18)的表達(dá)(P>0.05)。組織病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)單純膿胸組和對照組的胸膜出現(xiàn)了嚴(yán)重的損傷(蛋白滲出、白細(xì)胞浸潤)，但LP17干

6、預(yù)可明顯減輕炎癥程度。對照組(n=20)、LP17組(n=20)、空白組(n=20)胸穿注射銅綠假單胞菌與金黃色葡萄球菌混合懸液后8天的生存情況顯示LP17組生存率達(dá)40％，而對照組生存率僅有15％(P<0.05)，空白組沒有大鼠死亡。 結(jié)論:銅綠假單胞菌與金黃色葡萄球菌在24h內(nèi)導(dǎo)致大鼠發(fā)生嚴(yán)重的化膿性胸膜炎。在膿胸大鼠中，LP17的干預(yù)可減少胸水細(xì)胞總數(shù)與中性粒細(xì)胞數(shù)、降低胸水炎癥因子IL-1β的濃度、明顯減輕大鼠胸膜炎癥反