大鼠腸巨噬細(xì)胞TREM-1表達(dá)對(duì)其侵襲力和腸上皮細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的:
　　 探討髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1（Triggering receptor expressed on myeloid cells-1，TREM-1）在腸巨噬細(xì)胞中的表達(dá)對(duì)腸巨噬細(xì)胞侵襲力和腸上皮細(xì)胞增殖的影響，進(jìn)一步明確腸巨噬細(xì)胞在腸屏障功能障礙（intestinal barrier dysfunction，IBD）中可能機(jī)制。
　　 方法:
　　 (1)體外分離、培養(yǎng)腸巨噬細(xì)胞及腸上皮細(xì)胞，將腸巨噬細(xì)胞分為

2、三組:
　　 ①空白對(duì)照組（Control組）:加入含10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基;
　　 ②脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）組（LPS組）:用LPS處理腸巨噬細(xì)胞，RPMI-1640培養(yǎng)液中LPS終濃度為1μg/ml;
　　 ③LPS+LP17組:用LPS及LP17聯(lián)合處理腸巨噬細(xì)胞，RPMI-1640培養(yǎng)液中LPS終濃度為1μg/ml，LP17終濃度為100 ng/ml。

3、r>　　 (2)利用逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription-polymerase chainreaction，RT-PCR)檢測(cè)三組實(shí)驗(yàn)中大鼠腸巨噬細(xì)胞TREM-1和腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）的基因表達(dá)水平。
　　 (3)用Tanswell板將腸巨噬細(xì)胞和腸上皮細(xì)胞共培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)按上述分組分別處理腸巨噬細(xì)胞，利用MTT法繪制腸上皮細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，Matr

4、igel侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腸巨噬細(xì)胞對(duì)腸上皮細(xì)胞的侵襲力。
　　 結(jié)果:
　　 (1)LPS組TREM-1及TNF-α的基因表達(dá)水平高于LPS+LP17組和Control組(均P＜0.05); LPS+LP17組與Control組相比無差異。
　　 (2) MTT法繪制的腸上皮細(xì)胞生長(zhǎng)曲線顯示，兩實(shí)驗(yàn)組與Control組相比，腸上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)均受到抑制（均P＜0.05）;但對(duì)LPS組腸上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制大于LPS+LP

5、17組(P＜0.05)。
　　 (3)侵襲實(shí)驗(yàn)中3組試驗(yàn)平均穿膜細(xì)胞數(shù)分別為（29.3±2.1）、（46.0±3.6），（34.7±3.1）。LPS組與Control組比較差異具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，LPS組與LPS+LP17組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 (1) LPS可以刺激腸巨噬細(xì)胞TREM-1和TNF-α的表達(dá)，TREM-1特異性阻斷劑LP17不但能有效抑制腸巨