肉雞腸上皮細(xì)胞抗氧化酶系統(tǒng)表達(dá)和調(diào)控研究.pdf

1、腸道抗氧化酶系統(tǒng)在氧化應(yīng)激中起到重要作用。本研究首先探討了肉雞腸道抗氧化酶系統(tǒng)的時(shí)空表達(dá)規(guī)律及與吸收能力的關(guān)系；其次建立了雞腸上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)技術(shù)，并利用H2O2建立了體外氧化應(yīng)激模型。初步探討了Nrf2以及MAPK信號(hào)通路參與氧化損傷的調(diào)控機(jī)制。本研究為家禽腸道發(fā)育提供了理論支持，為腸道損傷機(jī)制的研究奠定了科學(xué)基礎(chǔ)。
　　試驗(yàn)一肉雞腸道抗氧化酶系統(tǒng)的時(shí)空表達(dá)規(guī)律。選取1日齡AA肉雞120只，隨機(jī)分成8組，每組15只。分別在1、

2、3、7、11、14、21及35日齡采集十二指腸、空腸、回腸、心臟、肝臟和腎臟進(jìn)行抗氧化酶表達(dá)檢測(cè)。結(jié)果顯示，肉雞腸道抗氧化酶活性顯著低于心臟、肝臟和腎臟；腸道中CAT和GPx的活性隨日齡增長顯著下調(diào)，抗氧化酶系統(tǒng)相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào)（P<0.05），腸道發(fā)育過程中Nrf2的mRNA表達(dá)量降低（P<0.05）；35d腸道CAT活性顯著高于腸粘膜，但mRNA表達(dá)水平較粘膜低（P<0.05）；免疫組化結(jié)果表明，腸道抗氧化酶主要存在

3、于粘膜層的腸絨毛上皮細(xì)胞內(nèi)。以上結(jié)果表明腸道抗氧化酶隨日齡增加表達(dá)量降低，Nrf2可能對(duì)該過程起調(diào)控作用。
　　試驗(yàn)二不同吸收效率肉雞腸道抗氧化酶系統(tǒng)分析。利用D-木糖吸收測(cè)試篩選不同吸收效率的肉雞。比較不同吸收效率的肉雞血清抗氧化系統(tǒng)及腸道抗氧化酶、形態(tài)結(jié)構(gòu)和養(yǎng)分轉(zhuǎn)運(yùn)載體表達(dá)的差異。24日齡和28日齡對(duì)肉雞進(jìn)行D-木糖吸收測(cè)試，篩選出的兩組肉雞血清內(nèi)D-木糖含量均顯著差異（P<0.05）；高吸收組肉雞血清內(nèi)T-SOD活性（P<0

4、.05）以及MDA含量（P=0.10）低于低吸收組肉雞；高吸收組肉雞回腸CAT活性明顯高于低吸收組（P<0.05）；高吸收組回腸絨毛高度和回腸絨毛高度/隱窩深度顯著高于低吸收組（P<0.05）；兩組肉雞腸道SGLT1、CAT1、CAT2和b0，+AT的表達(dá)存在差異（P<0.05）。以上結(jié)果表明D-木糖吸收試驗(yàn)可以成功篩選出不同吸收效率的肉雞，其原因可能是腸道形態(tài)和養(yǎng)分載體表達(dá)不同，但吸收效率對(duì)腸道抗氧化酶系統(tǒng)無明顯影響。
　　試驗(yàn)

5、三雞腸上皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定。選取18胚齡的SPF雞胚，分離十二指腸，使用機(jī)械擠壓和?型膠原酶消化聯(lián)合獲取腸粘膜上皮細(xì)胞。48h貼壁生長后，顯微鏡下觀察可見鋪路石狀細(xì)胞；通過H.E和吉姆薩染色確定上皮細(xì)胞形態(tài)；電子顯微鏡顯示有微絨毛、緊密連接結(jié)構(gòu)和橋粒等超微結(jié)構(gòu)；檢測(cè)結(jié)果表明分離培養(yǎng)的上皮細(xì)胞能夠表達(dá)特異性蛋白：堿性磷酸酶、CK18及Claudin-1。以上結(jié)果表明腸上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)方法建立成功。
　　試驗(yàn)四氧化應(yīng)激對(duì)腸上皮細(xì)

6、胞的影響。分別用5mmol/mL和10mmol/mL的H2O2刺激原代雞腸上皮細(xì)胞1h。結(jié)果顯示隨H2O2濃度升高，細(xì)胞抗氧化酶系統(tǒng)表達(dá)下降，氧化損傷加重；氧化應(yīng)激導(dǎo)致腸上皮細(xì)胞ERK1/2、JNK和p38蛋白磷酸化水平上調(diào)（P<0.05）；腸上皮細(xì)胞Nrf2及其下游基因的mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào)（P<0.05）。以上結(jié)果表明H2O2處理能夠造成腸上皮細(xì)胞急性氧化損傷，破壞抗氧化-氧化平衡，同時(shí)MAPK信號(hào)通路及Nrf2信號(hào)通路可能參與