TGF-β對(duì)小鼠肺內(nèi)TREM-1表達(dá)的影響及其機(jī)制.pdf

1、髓樣細(xì)胞表達(dá)觸發(fā)受體-1(TREM-1)可通過(guò)放大Toll樣受體(TLR)及Nod樣受體(NLR)介導(dǎo)的免疫應(yīng)答信號(hào)，延長(zhǎng)巨噬細(xì)胞壽命，發(fā)揮炎癥放大作用。TGF-β被公認(rèn)為肺纖維化最為關(guān)鍵的致纖維化因子，TREM-1可顯著上調(diào)TGF-β家族的表達(dá)，而TGF-β對(duì)TREM-1表達(dá)的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　目的:
　　觀察TGF-β對(duì)小鼠肺內(nèi)TREM-1表達(dá)的影響并探討其機(jī)制。
　　方法:
　　Swiss小鼠經(jīng)氣管一次

2、性注射博萊霉素(BLM)15 mg/kg復(fù)制肺纖維化模型，分別于第7、14和21天處死。HE染色和Masson染色驗(yàn)證肺纖維化小鼠模型是否建立成功;Real-time PCR或RT-PCR檢測(cè)Ⅰ、Ⅲ型膠原、TGF-β、TREM-1及其轉(zhuǎn)錄因子c-Jun的轉(zhuǎn)錄水平;Western Blot檢測(cè)小鼠肺組織TREM-1的蛋白含量;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)含TREM-1的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，以反映小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1的蛋白水平;定點(diǎn)突變技術(shù)和雙熒光素酶報(bào)告基

3、因試驗(yàn)證明轉(zhuǎn)錄因子c-Jun參與TGF-β上調(diào)小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1表達(dá)的轉(zhuǎn)錄機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　肺纖維化小鼠模型建立成功。小鼠肺組織TGF-β和TREM-1表達(dá)在BLM組第7、14和21天均增加(P＜0.05)，且二者呈正相關(guān)（r=0.787，P＜0.05）。TGF-β呈時(shí)間和劑量依賴性上調(diào)小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1 mRNA和蛋白水平(P＜0.05)。小鼠肺組織c-Jun mRNA表達(dá)在BLM組第7、14和21天增加

4、(P＜0.05)，且分別與TGF-β（r=0.713，P＜0.05）、TREM-1的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.906，P＜0.05)。TGF-β呈時(shí)間和劑量依賴性上調(diào)小鼠巨噬細(xì)胞c-Jun mRNA表達(dá)(P＜0.05)。定點(diǎn)突變技術(shù)和雙熒光素酶報(bào)告基因試驗(yàn)結(jié)果顯示:TGF-β刺激顯著增加TREM-1野生型質(zhì)粒的相對(duì)熒光強(qiáng)度(P＜0.05)，而對(duì)TREM-1突變型質(zhì)粒（TREM-1的AP-1位點(diǎn)定點(diǎn)突變）無(wú)明顯影響（P＞0.05）。PKC抑制

5、劑H-7、CaM抑制劑W-7及MAPK抑制劑PD98059顯著逆轉(zhuǎn)TGF-β誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1 mRNA和蛋白水平的上調(diào)（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.TREM-1在肺纖維化小鼠肺組織中表達(dá)增加。
　　2.肺纖維化小鼠肺組織TGF-β與TREM-1的表達(dá)呈正相關(guān)。
　　3.TGF-β上調(diào)小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1表達(dá)，其機(jī)制通過(guò)PKC、CaM及MAPK信號(hào)通路增加TREM-1的轉(zhuǎn)錄因子c-Jun水