脊髓背根神經節(jié)前體細胞在促進脊髓損傷功能恢復中作用的基礎研究.pdf

1、隨著現代工業(yè)生產和交通運輸業(yè)的飛速發(fā)展，創(chuàng)傷性脊髓損傷（spinal cord injury, SCI）的發(fā)病率逐年上升，急性SCI后神經功能的預后十分不理想，常常導致運動、感覺完全或部分喪失以及自主神經功能障礙，整個社會家庭和個人帶來了沉重的經濟和心理負擔。臨床中對于脊髓損傷的治療主要有手術治療、藥物治療，包括類固醇激素、神經營養(yǎng)藥物、脫水藥，以及其他物理治療等，但上述治療手段未達到滿意的治療效果。因此，對脊髓損傷后如何促進神經修復和

2、再生的研究成為廣泛關注的熱點問題。
　　細胞治療是脊髓損傷神經修復提供一種具有廣闊前景治療手段。然而，尋找合適的細胞來源一直以來是細胞治療領域研究的焦點。脊髓背根神經節(jié)中的前體細胞是目前研究較少的一類細胞，前人研究提示這類細胞可能具有自我增殖和多向分化的潛能。然而對于其在脊髓損傷修復過程中的作用目前尚未見明確報道。
　　目的：體外實驗中明確脊髓背根神經元前體細胞體外增殖特性及定向分化特征，建立大鼠脊髓損傷半切模型，為體內觀察

3、脊髓背根神經元前體細胞提供動物模型支持，繼而評估脊髓背根神經元前體細胞在體增殖及分化情況，初步探究其對脊髓損傷后功能恢復的影響。
　　材料與方法：將出生1天的大鼠脊髓背根神經節(jié)取材后，通過雙酶消化法獲得單細胞懸液，在干細胞培養(yǎng)液的作用下，通過CCK-8試劑盒檢測前體細胞吸光光度值來確定前體細胞的增殖特性。通過加入誘導分化試劑后檢測前體細胞的分化方向，用免疫熒光的方法來研究該類細胞向神經系統(tǒng)各類細胞分化的比例。以重組腺相關病毒作為載

4、體將前體細胞標記上綠色熒光蛋白后移植到脊髓半切損傷模型大鼠的損傷部位作為實驗組，注射生理鹽水作為對照組，細胞移植后1，4，6周通過BBB-21評分法來確定前體細胞移植對脊髓損傷大鼠神經功能恢復的影響，通過免疫熒光的方法研究前體細胞在脊髓中的遷移和分化。數據采用單因素方差進行統(tǒng)計學分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義.
　　結果：在體外通過雙酶消化法得到的單細胞懸液，經過控制純化的條件得到高純度的背根神經前體細胞。在干細胞培養(yǎng)液的

5、作用下，前體細胞呈現干細胞特有的克隆團樣增殖，通過CCK-8試劑盒檢測前體細胞吸光光度值，證實前體細胞具有自我增殖的能力。通過加入誘導分化試劑刺激前體細胞進行分化，證實前體細胞主要向膠質細胞方向進行分化，僅有少部分細胞分化為神經元。在注入脊髓損傷模型后，實驗組和對照組通過不同時間點BBB-21評分證實前體細胞移植組BBB-21評分明顯高于生理鹽水注射組，通過單因素方差分析再次證實兩組之間具有明顯的統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。免疫熒光檢測