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1、目的:研究模擬在脊髓損傷的微環(huán)境中,Taxol與Y27632聯(lián)合應(yīng)用對(duì)新生SD(Sprague Dawley,SD)大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元的軸突生長(zhǎng)的影響。
方法:①21只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組7只,手術(shù)組7只(用改良Allen法制作雌性成年SD大鼠T9平面完全性截癱模型),假手術(shù)對(duì)照組7只。制模后7天后取出T8~T10段脊髓,并經(jīng)過(guò)分離、過(guò)濾形成組織勻液制備脊髓萃取液。②分離、培養(yǎng)以及鑒定新生SD大鼠的背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元(dor
2、sal root ganglion neurons,DRGNs)。③分組培養(yǎng)、觀察脊髓萃取液對(duì)DRG神經(jīng)元軸突生長(zhǎng),分別為:A組DRGNs+50μlPBS,B組DRGNs+50μl假手術(shù)組脊髓萃取液,C組DRGNs+50μl損傷脊髓萃取液,D組DRGNs+50μl對(duì)照組脊髓萃取液。培養(yǎng)2d后,各組于倒置顯微鏡下測(cè)量軸突生長(zhǎng)的平均長(zhǎng)度,然后運(yùn)用免疫熒光染色技術(shù),測(cè)量軸突遠(yuǎn)端微管熒光平均密度。實(shí)驗(yàn)2:DRGNs、脊髓萃取液分別和共同與Y27
3、632,Taxol培養(yǎng)、DRG神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)。共分為五組, A組為DRGNs+50μlPBS,B組為DRGNs+50μl脊髓萃取液(假手術(shù)組);C組為DRGNs+50μl完全性截癱大鼠脊髓萃取液+3 nM Taxol,D組為DRGNs+50μl完全性截癱大鼠脊髓萃取液+30μM Y27632;E組,DRGNs+50μl完全性截癱大鼠脊髓萃取液+3nM Taxol+30μMY27632。培養(yǎng)1d,2d后于倒置顯微鏡下測(cè)量軸突生長(zhǎng)的平均長(zhǎng)度
4、,然后運(yùn)用免疫熒光染色技術(shù),測(cè)量軸突遠(yuǎn)端微管熒光平均密度。
結(jié)果:①實(shí)驗(yàn)1:共同培養(yǎng)2d后,各組軸突生長(zhǎng)平均長(zhǎng)度:A組為142.1±5.7μm,B組為144.8±3.1μm, C組為47.2±3.5μm,D組為136.9±4.2μm。單因素方差分析示:C組和A、B、D組之間,P<0.01,有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;軸突遠(yuǎn)端平均微管熒光密度, A組為175.1±2.9 AFU/μm,B組為191.6±3.1 AFU/μm, C組為64
5、.5±1.5 AFU/μm,D組為174.8±3.1 AFU/μm。C組和A、B、D組相比較,P<0.01,有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。②實(shí)驗(yàn)2:共同培養(yǎng)1d后,各組軸突平均長(zhǎng)度: A組為136.5±4.6μm, B組為47.6±3.9μm, C組為137.9±5.2μm, D組為158.6±4.6μm, E組為181.2±5.2μm,單因素方差分析示:B組和A、C、D及E組相對(duì)比,P<0.01,有顯明的統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異。2 d后,軸突平均長(zhǎng)度,
6、A組為142.9±1.4μm,B組為44.5±2.2μm,C組為152.6±5.3μm,D組為168.1±3.1μm,E組為194.6±3.2μm。單因素方差分析示:B組與A、C、D及E之間,P<0.01,有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。C組和D、E組相比較,P<0.05,有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。E組和 A、B、C、D組相比較,P<0.01,有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;A組與C組之間,P>0.05,兩者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。軸突遠(yuǎn)端平均微管熒光密度, A組為181.8
7、±3.4 AFU/μm, B組為61.6±2.7 AFU/μm, C組為205.2±2.1 AFU/μm, D組為401.2±3.5 AFU/μm,E組為470.2±3.6 AFU/μm。B組和A、C、D、E組相比較,P<0.01,有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。E組和A、B、C、D組相比較,P<0.01,有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;C組與E組之間,P>0.05,兩者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
結(jié)論:① DRGNs置于完全性截癱大鼠脊髓萃取液中培養(yǎng),其軸突的
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