東亞鉗蝎毒素活性多肽對(duì)大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元鈉離子通道的作用研究.pdf

1、一、東亞鉗蝎毒素活性多肽的分離純化及性質(zhì)鑒定運(yùn)用經(jīng)典色譜法對(duì)東亞鉗蝎(Buthus martensi Karsch，BmK)蝎毒素多肽進(jìn)行了分離和純化，得到了BmK2255多肽單體。運(yùn)用Edman降解法測(cè)序，得到了BmK2255的全長(zhǎng)序列為VRDGYIADDK NCAYFCGRNA YCDEE CLING AESGY CQQAG VYGNA CWCYK LPDKVPIRVS GECQQ；通過(guò)ESI-MS測(cè)定，BmK2255的分子量為72

2、23 Da；根據(jù)BmK2255的測(cè)序結(jié)果，通過(guò)檢索和氨基酸序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，BmK2255與已發(fā)現(xiàn)的Bukatoxin的氨基酸序列一致。 二、東亞鉗蝎毒素多肽Bukatoxin對(duì)大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元TTX-R鈉離子通道的作用采用膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)，觀察了東亞鉗蝎毒素多肽Bukatoxin對(duì)大鼠背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion，DRG)神經(jīng)元TTX-R鈉離子通道的作用。結(jié)果表明：(1)20、40、80μg/ml的

3、Bukatoxin對(duì)TTX-R鈉離子通道電流峰值的抑制率分別為(18.72±1.27)％、(27.40±4.97)％和(59.02±4.71)％(n=4，P<0.05)。半數(shù)抑制濃度(IC50)為66.28 μg/ml，Hill系數(shù)(h)為1.48；(2)對(duì)TTX-R鈉離子通道激活和失活動(dòng)力學(xué)分析表明：Bukatoxin可以電壓依賴性地影響TTX-R鈉離子通道激活和失活過(guò)程，使TTX-R鈉離子通道激活向去極化方向略有移動(dòng)，失活向超極化方

4、向移動(dòng)6 mV，使TTX-R鈉離子通道開(kāi)放時(shí)間明顯縮短，從而引起TTX-R鈉離子通道電流的降低。 三、東亞鉗蝎毒素多肽Bukatoxin對(duì)大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元TTX-S鈉離子通道的作用采用膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)，觀察了東亞鉗蝎毒素多肽Bukatoxin對(duì)大鼠DRG神經(jīng)元TTX-S鈉離子通道的作用。結(jié)果表明： (1)20、40、80μg/ml的Bukatoxin能分別使TTX-S鈉離子通道電流的峰值增大(3.90±1.44)

5、％、(10.10±3.56)％和(30.98±1.98)％(n=6，P<0.05)。半數(shù)有效濃度(EC50)為105.52μg/ml，Hill系數(shù)(h)為1.48；(2)對(duì)TTX-S鈉離子通道激活和失活動(dòng)力學(xué)分析表明：Bukatoxin可以電壓依賴性地影響TTX-S鈉離子通道激活和失活過(guò)程，使TTX-S鈉離子通道激活向超極化方向移動(dòng)9 mV，失活向去極化方向移動(dòng)10 mV，使TTX-S鈉離子通道開(kāi)放時(shí)間明顯延長(zhǎng)，從而引起TTX-S鈉離子