姜黃素對大鼠脊髓缺血再灌注損傷后NF-κB和Hsp70的表達研究.pdf

1、目的：為探討姜黃素對缺血再灌注損傷的作用機制,本實驗構建了大鼠脊髓缺血再灌注損傷模型,觀察姜黃素對脊髓組織損傷后的作用,并用不同的方法檢測NF-κB和Hsp70的動態(tài)表達變化，將有助于從分子水平上更有效的尋求缺血再灌注損傷的治療靶點，為臨床治療脊髓損傷提供新的思路。
　　方法:將72只雄性SD大鼠隨機分為姜黃素實驗組、缺血模型組和正常對照組,每組24只,水合氯醛0.3mg/kg腹腔麻醉后,仰臥于工作臺,無菌下腹正中縱行打開腹腔,暴

2、露腹主動脈,辨認雙側腎動脈,前兩組經夾閉左右腎動脈之間腹主動脈制作脊髓缺血再灌注損傷模型；對照組不做任何處理。實驗組缺血前10min舌下靜脈注射20mg/kg姜黃素；模型組缺血前10min舌下靜脈注射同等量生理鹽水；對照組經舌下靜脈注射等量的生理鹽水。再灌注3、12、24、72h不同時間點各取6只大鼠腰段脊髓組織,分別經HE染色、免疫組織化學法和Westernblot法檢測NF-κB和Hsp70的表達。
　　結果：1、大鼠脊髓組織

3、學改變
　　1.1HE染色觀察正常對照組:神經細胞輪廓清晰,核仁清楚，胞漿均勻深染,整個組織結構完整、清楚。缺血模型組:再灌注3h可見部分神經細胞腫脹,核仁不清。再灌注12h可見神經細胞輪廓不清,核皺縮,胞漿中可見空泡變性。再灌注24h灰質區(qū)大部分神經元變性壞死,胞漿中可見廣泛空泡形成。再灌注72h可見灰質結構混亂,膠質細胞增生,可見出血灶。姜黃素實驗組：再灌注3h,神經元結構清晰,核仁清楚,組織輕度水腫。再灌注12h可見神經細胞

4、輕度腫脹,部分神經元核仁不清。再灌注24h、72h組織病理學改變較模型組明顯見好,組織腫脹減輕,可見灰質區(qū)部分神經元變性、少量空泡化。
　　1.2免疫組化檢測NF-κBp65的表達:各組脊髓組織NF-κBp65均有表達,模型組再灌注后3h可見其表達開始增多,24h明顯增多且相對達高峰（P<0.01）,72h逐漸下降。而姜黃素實驗組NF-κBp65表達在相同時間點呈中度增多（P<0.05），但仍高于對照組的表達。
　　1.3免

5、疫組化檢測Hsp70的表達:各組脊髓組織Hsp70均有表達,模型組再灌注后3h可見其表達開始增多,隨時間延長呈逐漸上升趨勢，24h明顯增多達高峰（P<0.05）。而姜黃素實驗組Hsp70表達在相同時間點呈中度增多（P<0.05），但仍高于對照組的表達。
　　2、Westernblot法檢測NF-κB和Hsp70的表達
　　在姜黃素實驗組和模型組中，大鼠脊髓組織于缺血再灌注后NF-κB和Hsp70蛋白在相同時間點內表達趨勢基本

6、一致。實驗組3hNF-κB和Hsp70蛋白開始增加（P<0.05與對照組NC比較）,并隨時間的延長其蛋白表達水平相應性升高，12h明顯增多（P<0.01），24h達高峰（P<0.05）,72h逐漸減少。正常對照組僅有少量的NF-κB和Hsp70蛋白表達。
　　3、結果表明,與模型組相比，脊髓組織病理學檢查示：姜黃素實驗組神經細胞損傷相對較輕。再灌注損傷后相同的時間點實驗組中NF–κB的表達相對較低,而Hsp70的表達相對較高，其差

7、異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，這表明姜黃素預處理對大鼠脊髓缺血再灌注損傷具有保護作用。同時也觀察到缺血再灌注后隨著時間延長NF-κB和Hsp70的表達逐漸升高,多于24h時達高峰。
　　結論：1、大鼠脊髓缺血再灌注損傷模型，是目前臨床上模擬缺血再灌注損傷的一種較為理想的動物模型。
　　2、脊髓缺血再灌注損傷后可致組織發(fā)生一系列炎性改變，同時上調NF-κB和Hsp70的表達，可能對脊髓組織在應激方面起了重要的保護角色。