姜黃素對大鼠腦缺血再灌注損傷時NF-κB、ICAM-1、Caspase-3蛋白表達及細胞凋亡的影響.pdf

1、目的：觀察大鼠腦缺血再灌注損傷（ischemia reperfusion injury）時海馬神經元核因子κB（Nuclear factor-κB，NF-κB）及細胞間黏附分子1（Intercellularadhesion molecular1，ICAM-1），caspase-3隨再灌注時間表達變化的情況，觀察姜黃素（curcumin，cur）對三者表達及細胞凋亡的影響，探討姜黃素腦保護的分子機制。 研究方法：制作Sprague

2、-dawley（S-D）大鼠全腦缺血再灌注損傷模型。實驗分為空白對照組（BC組）、假手術組（S組）、缺血組（IR組）、姜黃素預處理組（Cur組）及溶劑對照組（SC組）；BC組不做任何處理；S組僅燒灼雙側椎動脈，游離雙側頸總動脈但不阻斷；其余三組在燒灼雙側椎動脈、游離雙側頸總動脈后24小時，阻斷雙側頸總動脈15分鐘，造成四動脈阻塞全腦缺血模型。Cur組、SC組大鼠分別在缺血前1小時腹腔注射姜黃素（200 mg/kg）或等容積溶媒。除BC組

3、外，其余各組于再灌注后2h、6h、1d、3d、7d處死。將各組動物分為兩個亞組（n＝5），第Ⅰ組多聚甲醛固定后取腦，HE染色觀察海馬錐體細胞形態(tài)改變、TUNEL法觀察海馬CA1區(qū)凋亡細胞數(shù)、免疫組化觀察海馬NF-κB蛋白和caspase-3的表達；第Ⅱ組大鼠取新鮮海馬組織，勻漿后取上清液，用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定海馬組織ICAM-1蛋白含量。 結果：1．光鏡觀察：S組海馬各區(qū)錐體細胞排列整齊，邊界清楚，核膜邊界清晰，核仁深染、清晰

4、。IR組細胞輪廓消失，大部分細胞出現(xiàn)胞漿固縮，核固縮、碎裂。Cur組70%細胞邊界基本清楚，核形狀基本規(guī)則，核邊界基本清晰，但少數(shù)細胞出現(xiàn)核染色變深，胞漿部分消失等變性表現(xiàn)。 2．NF-κB表達的變化：S組各時間點海馬CA1區(qū)無NF-κB的陽性細胞表達。缺血再灌注（IR組、Cur組、SC組）2h各組亦無NF-κB陽性細胞出現(xiàn)。IR組在缺血再灌注6h后，大鼠缺血腦細胞內可見NF-κB的表達（17．56±4．62），并隨再灌注時間而

5、表達逐漸增多，再灌注1d其表達值達最高峰（49．52±10．28），3d時表達明顯較前兩時點減少（36．52±8．71），7d時則更低（12．68±3．06）。各時間點間比較均有顯著性差異（P<0．05）。與IR組相比，Cur組海馬CA1區(qū)NF-κB的表達規(guī)律與IR組相似，即在再灌注后6h開始表達，1d達表達高峰后開始回落，至7d降至最低水平。Cur組海馬CA1區(qū)在再灌注后6h、1d、3d、7d四點NF-κB的表達水平均明顯低于相應時間

6、點IR組及SC組（P<0．05）。 3．ICAM-1蛋白含量：假手術S組各時間點海馬區(qū)ICAM-1蛋白有少量表達，缺血再灌注后，2h大鼠海馬ICAM-1蛋白有少量表達，6h蛋白含量開始增加，1d時含量達高峰，3d還保持較高水平，7d迅速降低達基礎水平，與S組比較，6h，1d，3d有顯著差異（P<0．01）。再灌注后各時間點Cur組海馬ICAM-1蛋白含量均低于IR組及SC組，其中在1d和3d時間點有顯著差異（P<0．05）。

7、 4．Caspase-3表達的變化：S組各時間點無Caspase-3蛋白表達，其余各組在再灌注6h Caspase-3蛋白表達開始增高，1d達峰并持續(xù)到3d開始下降，7d仍有較弱表達。IR組再灌注6h、1d、3d各點Caspase-3蛋白表達水平明顯高于Cur組（P<0．05），Cur組再灌注6h、1d、3d各點Caspase-3蛋白表達水平明顯低于SC組（P<0．05）。 5．凋亡細胞計數(shù)：各實驗組凋亡細胞主要集中在CA1

8、區(qū)，再灌注2h出現(xiàn)少量凋亡細胞后逐漸增加，3d達到高峰后減少，至7d仍有少量凋亡細胞存在，IR組各時間點凋亡細胞數(shù)明顯高于S組、SC組及Cur組（P<0．05），Cur組凋亡細胞數(shù)明顯少于SC組（P<0．05）。 結論：大鼠腦缺血再灌注可引起海馬CA1區(qū)神經元ICAM-1及NF-κB的異常表達，且隨再灌注時間呈動態(tài)變化，提示ICAM-1及NF-κB參與了缺血再灌注損傷過程。姜黃素可減輕腦缺血后海馬CA1區(qū)病理損害及凋亡發(fā)生，其機