姜黃素對大鼠全腦缺血再灌注損傷誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響.pdf

1、目的:觀察姜黃素對大鼠腦缺血再灌注后海馬CA1區(qū)GRP78、GADD153和Caspase-12表達(dá)及神經(jīng)元凋亡的影響,闡明姜黃素對大鼠全腦缺血再灌注損傷誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響,進(jìn)一步闡明姜黃素腦保護(hù)作用的分子機(jī)制,為該藥臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　 方法:雄性SD大鼠144只,隨機(jī)分成四組:假手術(shù)組(S組)、缺血再灌注組(IR組)、溶劑對照組(VC組)及姜黃素組(Cur組)。S組僅燒灼雙側(cè)椎動脈,游離雙側(cè)頸總動脈但不阻

2、斷；其余三組在燒灼雙側(cè)椎動脈、游離雙側(cè)頸總動脈24 h后,阻斷雙側(cè)頸總動脈15 min,建立四血管閉塞全腦缺血模型,VC組大鼠在缺血前1 h腹腔注射羧甲基纖維素鈉,Cur組大鼠在缺血前1 h腹腔注射姜黃素200 mg/kg;上述實(shí)驗(yàn)組在再灌注12 h、1 d、3 d、7 d四個時間點(diǎn)處死,并且上述四組再分為兩個亞組:①各時間點(diǎn)多聚甲醛灌注固定大腦組織后,通過HE染色觀察各時間點(diǎn)海馬細(xì)胞形態(tài)改變、免疫組化觀察GRP78、GADD153和C

3、aspase-12的表達(dá)及DNA斷端末端標(biāo)記(TUNEL)法標(biāo)記凋亡陽性細(xì)胞(n=6)；②各時間點(diǎn)大鼠急性斷頭處死,迅速冰上取海馬組織液氮低溫冰凍保存,裂解組織,提取目的蛋白,用免疫蛋白印跡法對GRP78、GADD153和Caspase-12進(jìn)行半定量分析(n=3)。
　　 結(jié)果:
　　 1、形態(tài)學(xué)變化:與S組海馬各區(qū)錐體細(xì)胞相比,VC組和IR組大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞排列稀疏、胞漿濃縮、胞核固縮碎裂；Cur組在相應(yīng)時間

4、點(diǎn)與IR組病理變化規(guī)律基本一致,但損傷較輕。
　　 2、凋亡細(xì)胞計數(shù):各實(shí)驗(yàn)組凋亡細(xì)胞主要集中在CA1區(qū),再灌注12h出現(xiàn)少量凋亡細(xì)胞后逐漸增加,3 d達(dá)到高峰后減少,至7 d仍有少量凋亡細(xì)胞存在,IR組各時間點(diǎn)凋亡細(xì)胞數(shù)明顯高于S組及Cur組(P<0.05)。
　　 3、GRP78、GADD153和Caspase-12表達(dá)的變化:
　　 A、免疫組化:GRP78在S組海馬CA1區(qū)有少量表達(dá)；IR組海馬CA1區(qū)G

5、RP78的表達(dá)在再灌注12 h開始升高,至1d達(dá)峰值后逐漸下降。VC組和IR組各時間點(diǎn)之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；Cur組CA1區(qū)GRP78的表達(dá)情況和規(guī)律與IR組相似,但表達(dá)水平明顯高于IR組(P<0.05)。GADD153在S組海馬CA1區(qū)有少量表達(dá)；IR組海馬CA1區(qū)GADD153的表達(dá)在再灌注12h開始升高,至3d達(dá)峰值后逐漸下降。VC組、IR組和Cur組各時間點(diǎn)之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。Caspase-1

6、2在S組海馬CA1區(qū)有少量表達(dá)；IR組海馬CA1區(qū)Caspase-12的表達(dá)在再灌注12h開始升高,至3d達(dá)峰值后逐漸下降。VC組和IR組各時間點(diǎn)之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；Cur組CA1區(qū)Caspase-12的表達(dá)情況和規(guī)律與IR組相似,但表達(dá)水平明顯低于IR組(P<0.05)。
　　 B、免疫蛋白印跡:GRP78在S組海馬有少量表達(dá)；IR組海馬GRP78的表達(dá)在再灌注12 h開始升高,至1d達(dá)峰值后逐漸下降。VC組

7、和IR組各時間點(diǎn)之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；Cur組GRP78的表達(dá)情況和規(guī)律與IR組相似,但表達(dá)水平明顯高于IR組(P<0.05)。GADD153在8組海馬有少量表達(dá)；IR組海馬區(qū)GADD153的表達(dá)在再灌注12 h開始升高,至3d達(dá)峰值后漸下降。VC組、IR組和Cur組各時間點(diǎn)之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。Caspase-12在S組海馬有少量表達(dá)；VC組于再灌注后12h表達(dá)明顯升高,至再灌注3d達(dá)高峰后逐漸下降。C