姜黃素對全腦缺血再灌注大鼠HMGB1表達(dá)的影響.pdf

1、目的： 觀察大鼠全腦缺血再灌注后HMGB1的變化規(guī)律；觀察姜黃素減輕腦缺血再灌注(IR)后損傷是否與抑制HMGB1有關(guān)。 方法： 雄性SD大鼠252只，隨機(jī)分成六組：空白對照組(BC組)、假手術(shù)組(SH組)、缺血再灌注組(IR組)、姜黃素預(yù)處理組(preCur組)、姜黃素后處理組(postCur組)及溶劑對照組(SC組)。BC組不做任何處理；SH組僅燒灼雙側(cè)椎動(dòng)脈，游離雙側(cè)頸總動(dòng)脈但不阻斷；其余四組在燒灼雙側(cè)椎動(dòng)

2、脈、游離雙側(cè)頸總動(dòng)脈后24h，阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈15min，造成四動(dòng)脈阻塞全腦缺血模型。IR組、pfeCur組、SC組大鼠分別在缺血前1h腹腔注射等劑量姜黃素(200mg/kg)或等容積溶媒，postCur組在再灌注后30min腹腔注射等劑量姜黃素；除BC組外，其余五組大鼠分別在再灌注后1d、3d、Sd、7d處死；上述五組再分為兩個(gè)亞組(各時(shí)間點(diǎn)n=12)：①多聚甲醛灌注固定腦組織后，通過HE染色觀察海馬細(xì)胞形態(tài)改變、尼氏染色觀察海馬神經(jīng)

3、元形態(tài)與結(jié)構(gòu)變化、免疫組化觀察海馬HMGB1的表達(dá)；②各時(shí)間點(diǎn)(n=6)大鼠心臟取血，低溫勻漿，離心后取上清，存于-70℃；將大鼠急性斷頭處死，迅速冰上分別提取皮層、海馬、紋狀體組織，液氮低溫冰凍保存。裂解組織和血清，提取目的蛋白，用免疫蛋白印跡法(Western blotting)對HMGB1進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果： 1.形態(tài)學(xué)變化： A.HE染色：BC組及SH組海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞邊界清楚，細(xì)胞核染色淺，核

4、仁清晰；IR組海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞排列稀疏，胞質(zhì)嗜伊紅染，核固縮深染。再灌注1d、3d、Sd、7d海馬CA1區(qū)存活細(xì)胞漸減少。preCur組和postCur組錐體細(xì)胞輪廓尚清，核形態(tài)規(guī)則。 B.尼氏染色：BC及SH組各時(shí)間點(diǎn)海馬各區(qū)錐體細(xì)胞排列整齊形態(tài)規(guī)整，呈椎形，胞漿均勻，呈淡藍(lán)色，細(xì)胞核淡染核仁深染，尼氏小體呈深藍(lán)色斑塊或顆粒狀，散在分布于核周。再灌注1d起，IR組和SC組海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞胞膜皺縮，胞漿染色變淺，尼氏小

5、體模糊、消散。IR各組神經(jīng)細(xì)胞損傷程度以preCur組最輕，其次為postCur組，IR組和SC組損傷最重。 2.HMGB1表達(dá)的變化： A.免疫組化：再灌注后1d缺血各組海馬CA1區(qū)HMGB1的表達(dá)均下降，后升高于再灌注3d達(dá)峰，并持續(xù)高表達(dá)至再灌注7d。再灌注1d缺血各組HMGB1表達(dá)水平明顯低于BC組及SH組(P<0.05)，但兩Cur組HMGB1表達(dá)水平明顯高于IR組及SC組(P<0.05)，且preCur組表

6、達(dá)水平高于postCur組(P<0.05)。再灌注3d、5d、7d，IR組HMGB1表達(dá)水平明顯高于BC組及SH組(P<0.05)，兩Cur組HMGB1表達(dá)水平明顯低于IR組及SC組(P<0.05)，且preCur組表達(dá)水平低于postCur組(P<0.05)。SC組與IR組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 B.免疫蛋白印跡： B1.海馬：缺血各組HMGB1蛋白表達(dá)規(guī)律、結(jié)果同免疫組化結(jié)果一致。兩Cur組再灌注1d HMGB1

7、表達(dá)水平明顯高于IR組及SC組(P<0.05)，且preCur組表達(dá)水平高于postCur組(P<0.05)；再灌注3d、5d、7d HMGB1表達(dá)水平明顯低于IR組及SC組(P<0.05)，且preCur組表達(dá)水平低于postCur組(P<0.05)。SC組與IR組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 B2.皮層、紋狀體：皮層、紋狀體各組HMGB1蛋白的表達(dá)規(guī)律與海馬相似，各點(diǎn)HMGB1表達(dá)水平明顯低于海馬，皮層組織表達(dá)水平高于紋狀體。C

8、ur組對HMGB1表達(dá)的影響與海馬組織相似。 B3.血清：BC組大鼠僅有微量HMGB1蛋白表達(dá)。缺血各組HMGB1蛋白表達(dá)規(guī)律相似。再灌注1d HMGB1表達(dá)水平明顯高于BC組，并持續(xù)高表達(dá)至再灌注7d，各組內(nèi)HMGB1表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。兩Cur組再灌注各點(diǎn)HMGB1蛋白表達(dá)水平均明顯低于IR組和SC組(P<0.05)，且preCur組表達(dá)水平低于postCur組(P<0.05)。SC組與IR組相比差異無統(tǒng)