姜黃素預(yù)處理抑制全腦缺血再灌注大鼠TNF-α、IL-1β和皮質(zhì)酮高表達(dá).pdf

1、目的： 觀察姜黃素對(duì)全腦缺血再灌注大鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、IL-1β和TNF-α表達(dá)及血清皮質(zhì)酮的影響，探討姜黃素抗炎癥及抗應(yīng)激作用與腦保護(hù)之間的關(guān)系。 方法： 制作大鼠4VO全腦IR模型。將雄性SD大鼠200只隨機(jī)分成5組：空白對(duì)照組(BC組)、假手術(shù)組(SH組)、溶劑對(duì)照組(VC組)、姜黃素處理組(Cur組，200 mg·kg-1)和姜黃素+皮質(zhì)酮處理組(Cur+Cort組，200 mg·kg-姜黃素1+

2、40 mg·kg-1皮質(zhì)酮)。除BC組和SH組外，其余各組大鼠分別在造模前1h給予相應(yīng)藥物處理；除BC組外，其余各組于再灌注后2h、1d、3d、7d處死。將各組動(dòng)物分為兩個(gè)亞組，第Ⅰ組多聚甲醛固定后取腦，HE染色觀察海馬錐體細(xì)胞形態(tài)改變，Nissl染色后計(jì)數(shù)CA1區(qū)平均錐體細(xì)胞密度、免疫組化觀察海馬IL-1β和TNF-α，蛋白的表達(dá)；第Ⅱ組大鼠取新鮮海馬組織，勻漿后取上清液，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定海馬組織IL-1β和TNF-α

3、蛋白含量。另各組動(dòng)物處死前抽取靜脈血清，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)定量檢測(cè)皮質(zhì)酮水平。 結(jié)果： 1.形態(tài)學(xué)變化 VC組大鼠再灌注24 h時(shí)點(diǎn)海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞胞漿濃縮、胞核固縮深染；再灌注5d后，上述病理表現(xiàn)進(jìn)一步加重，錐體細(xì)胞排列稀疏。Cur組在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)與VC組病理變化規(guī)律基本一致，但損傷較輕；Cur+Cort組病理變化處于VC組和Cur組之間。 2.Nissl染色及平均錐體細(xì)胞密度 2.1 Ni

4、ssl染色 BC及SH組大鼠海馬各區(qū)錐體細(xì)胞形態(tài)規(guī)整，胞漿均勻呈淡藍(lán)色，尼氏小體呈深藍(lán)色斑塊或顆粒狀，散在分布于核周。再灌注24 h起，VC組海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞胞漿顏色變淺，尼氏小體模糊、消散。模型組錐體細(xì)胞損傷程度以Cur組最輕，其次為Cur+Cort組，VC組損傷較重。 2.2平均錐體細(xì)胞密度 全腦缺血再灌注后，大鼠海馬CA1區(qū)平均錐體細(xì)胞密度進(jìn)行性減少；再灌注1 d、3d和7d，VC組平均錐體細(xì)胞密度分

5、別為BC組的86.98％(P<0.05)、62.94％(P<0.01)和43.51％(P<0.01)。再灌注3d和7d，Cur組大鼠CA1平均錐體細(xì)胞密度較VC組增多。 3.IL-1β表達(dá) 3.1免疫組織化學(xué) 再灌注后2h，大鼠海馬CA1區(qū)IL-1β免疫活性顯著增加，1d達(dá)高峰后漸降低，7d降至基礎(chǔ)水平。VC組IL-1β免疫活性在缺血后2h、1d、3d、7d分別為相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)SH組的1.28倍(P<0.05)、2.

6、08倍(P<0.01)、1.65倍(P<0.01)和1.10倍(P>0.05)；Cur組大鼠IL-1β免疫活性再灌注后各時(shí)間點(diǎn)均較VC組低，在1 d和3d點(diǎn)有顯著差異。Cur+Cort組與Cur組比較無(wú)顯著差異。 3.2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 再灌注后2h，大鼠海馬IL-1β免疫活性迅速增加，1d達(dá)高峰后逐漸降低至基礎(chǔ)水平。Cur組再灌注后各時(shí)間點(diǎn)海馬IL-1β含量均較VC組低，在2h和1d點(diǎn)有顯著差異。Cur+Cort組與C

7、ur組比較無(wú)顯著差異。 4.海馬TNF-α表達(dá) 4.1免疫組織化學(xué) 全腦缺血再灌注后2h，大鼠海馬CA1區(qū)TNF-α免疫活性迅速增加并達(dá)高峰，再灌注后1d仍較高，后漸降低，到7d達(dá)基礎(chǔ)水平。VC組再灌注后2h、1d、3d、7 d TNF-α，免疫活性分別為相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)SH組的2.16倍(P<0.01)、1.67倍(P<0.01)、1.41倍(P<0.01)和0.96倍(P>0.05)。Cur組再灌注后TNF-α免疫

8、活性較VC組降低，但只有再灌注后2h有顯著差異(P<0.01)。Cur+Cort組與Cur組比較無(wú)顯著差異。 4.2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 再灌注2h大鼠海馬TNF-α含量迅速增加達(dá)高峰，1d仍保持較高水平，隨后降低達(dá)基礎(chǔ)水平。再灌注后各時(shí)間點(diǎn)Cur組海馬TNF-α含量均較VC組低，在2h和1d點(diǎn)有顯著差異(P<0.01)。Cur+Cort組與Cur組比較無(wú)顯著差異。 5.血清皮質(zhì)酮水平 再灌注2h，大鼠血清皮

9、質(zhì)酮水平迅速增加達(dá)高峰，隨后逐漸降低，但至再灌注后7d仍保持較高水平。Cur組再灌注后各時(shí)間點(diǎn)血清皮質(zhì)酮水平均較VC組低，在再灌注后2h、1d、3d、7d分別為VC組的65.05％(P<0.01)、69.96％(P<0.05)、56.63％(P<0.01)和67.05％(P<0.05)。Cur+Cort組再灌注后2h和1d點(diǎn)血清皮質(zhì)酮水平較Cur組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)顯著增高(P<0.01)，而再灌注后3 d和7d兩組間無(wú)顯著差異。 結(jié)論