針刺預(yù)處理對腦缺血再灌注大鼠血清皮質(zhì)酮及其中樞受體的應(yīng)變調(diào)控.pdf

1、目的： 本課題在證實(shí)針刺預(yù)處理抗腦缺血再灌注損傷作用基礎(chǔ)上，觀察針刺預(yù)處理對腦缺血再灌注模型大鼠血清皮質(zhì)酮(corticosterone，CORT)含量和腦糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor，GR)表達(dá)的調(diào)控作用及時(shí)間規(guī)律，探討針刺預(yù)處理抗腦缺血再灌注損傷作用的可能機(jī)制。 方法： 雄性Wistar大鼠168只，隨機(jī)分成四組。正常對照組、針刺預(yù)處理組、腦缺血再灌注組、針刺預(yù)處理腦缺血再灌

2、注組，每組大鼠42只。上述各組又分術(shù)后／針后0.5 h、3h、6h、24h、48h各五個(gè)時(shí)段亞組，除48h亞組10只外，其余每亞組大鼠8只。采用上海產(chǎn)G6805針灸治療儀行穴位電刺激，按一定方式對雙側(cè)腎俞、百會穴行針刺預(yù)處理，以通電10min，留針20min為一個(gè)針刺周期，連續(xù)重復(fù)4個(gè)針刺周期，共計(jì)2h。以頸動(dòng)脈引流法行全腦缺血再灌注造模，術(shù)后／針后分0.5h、3h、6h、24h、48h五個(gè)時(shí)間段眼球取血，室溫放置3h，3000r/mi

3、n離心15分鐘，取上清放入-70℃冰箱保存，免疫酶標(biāo)法檢測血清中皮質(zhì)酮含量，同一批次樣本于同一時(shí)間測定。4℃生理鹽水、4℃4％多聚甲醛經(jīng)左心室沖洗、灌注固定，4℃后固定過夜，25％蔗糖溶液4℃沉底，頂皮質(zhì)1區(qū)腦組織常規(guī)電鏡標(biāo)本制片，透射電鏡觀察；恒冷箱冰凍連續(xù)冠狀切片，免疫組化SABC法檢測大鼠下丘腦、海馬、大腦皮質(zhì)等區(qū)GR的表達(dá)變化，運(yùn)用HPIAS-1000高清晰彩色病理圖文分析系統(tǒng)進(jìn)行中樞GR免疫陽性物分析。 結(jié)果：

4、 1、針刺預(yù)處理組及正常組神經(jīng)元細(xì)胞核呈圓形，核膜完整，胞漿內(nèi)含豐富的線粒體，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)清晰可見；腦缺血再灌注組核染色質(zhì)邊集，核膜厚薄不一，線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張；針刺預(yù)處理腦缺血再灌注組雖亦有染色質(zhì)邊集，線粒體腫脹及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，但程度均較腦缺血再灌注組減輕。 2、針刺預(yù)處理組與正常對照組比較，0.5 h血清皮質(zhì)酮出現(xiàn)短暫升高(P<0.05)，之后快速回落至正常水平。 3、腦缺血再灌注模型大鼠血清皮質(zhì)酮含量在再灌注0.5

5、h急劇升高，再灌注6h達(dá)高峰(P<0.05)，24h后逐漸回落，但仍高于其它各組相應(yīng)時(shí)間段(P<0.05)，說明腦缺血再灌注損傷可導(dǎo)致血清皮質(zhì)酮急劇升高且呈現(xiàn)一定的時(shí)間規(guī)律。 4、針刺預(yù)處理腦缺血再灌注組血清皮質(zhì)酮含量與腦缺血再灌注組比較差異明顯，各時(shí)段均低于腦缺血再灌注組，尤以6h最為顯著(P<0.05)。說明腎俞、百會穴針刺預(yù)處理對大鼠腦缺血再灌注后血清皮質(zhì)酮異常波動(dòng)具有較強(qiáng)的干預(yù)作用。 5、腦缺血再灌注模型大鼠術(shù)后

6、6 h中樞GR表達(dá)明顯減少(P<0.05)，24h降到最低，48h后逐漸回升，但仍低于正常組相應(yīng)時(shí)間段(P<0.05)。說明腦缺血再灌注損傷可導(dǎo)致中樞受體顯著降低且呈現(xiàn)一定的時(shí)間規(guī)律。 6、針刺預(yù)處理腦缺血再灌注組中樞GR表達(dá)與腦缺血再灌注組比較，6h、24h、48h均低于腦缺血再灌注組，尤以24h最為顯著(P<0.05)，說明腎俞、百會穴針刺預(yù)處理可下調(diào)腦缺血再灌注時(shí)頂皮質(zhì)I區(qū)V層神經(jīng)元GR的表達(dá)。 結(jié)論： 1