缺血預(yù)處理后不同間隔時間對大鼠腦缺血再灌注自噬的影響.pdf

1、目的:
　　研究自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3-II在缺血預(yù)處理后不同時間間隔大鼠腦缺血再灌注海馬中的表達(dá)，探討自噬在腦缺血預(yù)處理神經(jīng)保護作用的可能機制。
　　方法:
　　1.健康雄性SD大鼠50只隨機分為3組：假手術(shù)組、缺血再灌注組、缺血預(yù)處理組，缺血預(yù)處理組再按不同缺血預(yù)處理間隔時間分為24h、72h、5d3個亞組。
　　2.參照Zea-Longa線栓法制作大鼠大腦中動脈缺血預(yù)處理和缺血再灌注模型。

2、r>　　3.利用 TTC染色、photoshop圖像分析法、HE染色、免疫組織化學(xué)染色、觀察腦梗死體積、海馬神經(jīng)細(xì)胞病理變化、海馬神經(jīng)細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白Beclin-1及LC3-II表達(dá)的情況。
　　4.透射電鏡觀察神經(jīng)細(xì)胞中自噬超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　5.比較各組神經(jīng)功能缺失、腦梗死體積、海馬神經(jīng)細(xì)胞病理變化、海馬神經(jīng)細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白Beclin-1及 LC3-II表達(dá)、自噬體和各級溶酶體數(shù)量。
　　6.以Excel數(shù)據(jù)

3、庫整理后采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所得數(shù)據(jù)均以x±s表示，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。采用Microsoft Excel軟件作圖。
　　結(jié)果:
　　1.缺血預(yù)處理組神經(jīng)功能缺失癥狀較缺血再灌注組有所改善，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　2.與缺血再灌注組相比，缺血預(yù)處理組腦梗死體積縮小，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.HE染色可見假手術(shù)組神經(jīng)細(xì)胞無損傷；與缺血再灌注

4、組相比，缺血預(yù)處理各亞組海馬神經(jīng)細(xì)胞損傷減輕。
　　4.與假手術(shù)組相比，缺血再灌注組、缺血預(yù)處理組 Beclin-1的表達(dá)均明顯增強，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；缺血預(yù)處理組與缺血再灌注組比較，可見Beclin-1陽性細(xì)胞數(shù)減少，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　5.假手術(shù)組只見極少量LC3-II陽性細(xì)胞表達(dá)，而在缺血再灌注組及缺血預(yù)處理組均可見大量 LC3-II陽性細(xì)胞，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。缺

5、血預(yù)處理各亞組LC3-II陽性細(xì)胞表達(dá)顯著低于缺血再灌注組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　6.透射電鏡下缺血預(yù)處理組及缺血再灌注組均可見數(shù)量不等、處于不同期間的自噬體和自噬溶酶體，其數(shù)量在缺血預(yù)處理組明顯減少。
　　7.缺血預(yù)處理72h亞組相比較24h亞組和5d亞組腦梗死體積縮小（P<0.05），海馬神經(jīng)細(xì)胞損傷減輕，Beclin-1、LC3-II陽性細(xì)胞數(shù)不同程度減少（P<0.05），自噬體的形成和溶酶體的激活減

6、少。
　　結(jié)論:
　　1.采用改良后 Zea-Longa線栓法制作的大鼠大腦中動脈缺血預(yù)處理和缺血再灌注模型方法簡便、安全、數(shù)據(jù)可靠。
　　2.缺血預(yù)處理可減低缺血再灌注24小時后大鼠神經(jīng)功能障礙評分、腦梗死體積、海馬神經(jīng)細(xì)胞損傷，對缺血再灌注后神經(jīng)細(xì)胞損傷具有保護作用。
　　3.缺血預(yù)處理可能通過下調(diào)缺血再灌注24小時后自噬相關(guān)蛋白 Beclin-1、LC3-II的表達(dá)，以減少缺血再灌注損傷神經(jīng)細(xì)胞的自噬性死亡