前列腺素E1預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷NF-κB及ICAM-1表達(dá)的影響.pdf

1、近年來(lái),隨著心肌梗死后溶栓治療、冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)、經(jīng)皮冠脈腔內(nèi)成形術(shù)等心臟介入性治療的廣泛開(kāi)展,為挽救缺血心肌、縮小心肌梗死面積、改善患者臨床癥狀起到了良好的效果。然而由此帶來(lái)的心肌缺血再灌注損傷(MIRI)成為影響手術(shù)效果及病人預(yù)后的關(guān)鍵因素,如何減輕缺血再灌注損傷(IRI)成為亟待解決的問(wèn)題。PGEI具有抑制血小板聚集、血栓素A2生成、動(dòng)脈粥樣脂質(zhì)斑塊及免疫復(fù)合物形成的作用,并能擴(kuò)張外周和冠脈血管。本課題組曾對(duì)PGE1保護(hù)心肌的作用做

2、了大量的實(shí)驗(yàn)研究,證實(shí)其可以改善缺血再灌注心肌血流動(dòng)力學(xué)；有效減少心肌細(xì)胞CPK和LDH的漏出,減輕心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的損傷；增強(qiáng)再灌注心肌SOD活性,減少M(fèi)DA的生成,通過(guò)抗心肌脂質(zhì)過(guò)氧化途徑有效減輕MIRI；促進(jìn)bcl-2蛋白表達(dá),抑制bax蛋白表達(dá),明顯抑制缺氧復(fù)氧心肌細(xì)胞的凋亡；提高心肌內(nèi)Gαq／11的含量,促進(jìn)KATP通道開(kāi)放,減輕鈣超載；促進(jìn)PKC和HSP的表達(dá),提高細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)能力,保護(hù)缺血再灌注心肌。然而,對(duì)于PGE1預(yù)

3、處理在大鼠離體心肌缺血再灌注損傷中NF-κB和ICAM-1的表達(dá)所介導(dǎo)的炎癥損傷以及NF-κB和ICAM-1之間的聯(lián)系,尚未見(jiàn)報(bào)道。因此,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)Western blot技術(shù)和免疫組化方法觀察NF-κB和ICAM-1在缺血再灌注心肌中的表達(dá)規(guī)律,探討其在PGE1預(yù)處理對(duì)大鼠離體心肌缺血再灌注損傷中的作用,為PGE1作為藥理性預(yù)適應(yīng)(PPC)的有效藥物在防治心血管疾病方面的廣泛應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 目的:
　　 采用

4、Langendorff大鼠離體心臟灌流裝置制備心肌缺血再灌注損傷模型,探討PGE1預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷心肌細(xì)胞NF-κB及ICAM-1蛋白表達(dá)的影響,進(jìn)一步從炎癥信號(hào)通路揭示PGE1對(duì)心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的可能機(jī)制。
　　 研究方法:
　　 成年健康SD大鼠,雌雄各半,體重250-300g,隨機(jī)分為五組,每組8只:正常對(duì)照組、缺血再灌注組和PGE1小、中、大劑量(14μg／L、42μg／L、126μg／L

5、)預(yù)處理組,每組先用正常臺(tái)式液平衡灌流15min,正常對(duì)照組繼續(xù)用正常臺(tái)式液持續(xù)灌流3h；缺血再灌注組用正常臺(tái)式液灌流30min后停灌30min,然后再用正常臺(tái)式液灌流2h；PGE1各劑量(14μg／L、42μg／L、126μg／L)預(yù)處理組以正常臺(tái)式液平衡灌流15min后換用含不同劑量PGE1的正常臺(tái)式液灌流30min,停灌30min,以正常臺(tái)式液再灌注2h。灌流結(jié)束后速取左心室前壁,分為兩部分:一部分固定制備病理切片,HE染色觀察大

6、鼠心肌組織形態(tài)學(xué)的變化,并采用免疫組化法測(cè)定NF-κB及ICAM-1的表達(dá)變化；另一部分于液氮中凍存留做Western blot,半定量檢測(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)NF-κB表達(dá)量的變化。結(jié)果應(yīng)用SPSS17.0軟件包進(jìn)行單因素方差分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,組間比較采用LSD法,檢驗(yàn)結(jié)果均取α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果:
　　 1各組大鼠心肌組織形態(tài)學(xué)的變化
　　 光鏡下觀察,正常對(duì)照組心肌組織形態(tài)

7、學(xué)未見(jiàn)異常改變,肌纖維完整,染色均勻,心肌細(xì)胞排列緊密,橫紋清晰,間質(zhì)未見(jiàn)血管擴(kuò)張和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；缺血再灌注組大范圍心肌纖維斷裂、腫脹、壞死融合,染色不均勻,心肌細(xì)胞排列不規(guī)則,橫紋消失,間質(zhì)血管明顯擴(kuò)張和大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；PGE1小劑量(14μg／L)預(yù)處理組較大范圍心肌纖維斷裂、腫脹,心肌細(xì)胞排列紊亂,部分橫紋消失,間質(zhì)有血管擴(kuò)張和炎性細(xì)胞浸潤(rùn),但程度較缺血再灌注組有所減輕；PGE1中劑量(42μg／L)預(yù)處理組心肌纖維腫脹,但少有

8、斷裂,間質(zhì)血管擴(kuò)張不明顯,有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；PGE1大劑量(126μg／L)預(yù)處理組少許心肌纖維腫脹,無(wú)斷裂,間質(zhì)內(nèi)未見(jiàn)血管擴(kuò)張,偶有炎性細(xì)胞浸潤(rùn),形態(tài)學(xué)近似于正常對(duì)照組。
　　 2免疫組化染色法測(cè)定各組大鼠心肌組織中NF-κB及ICAM-1的表達(dá)
　　 (1)缺血再灌注組心肌組織NF-κB的表達(dá)量為47.36±3.27,與正常對(duì)照組(19.99±4.59)相比,其表達(dá)量明顯增加(P<0.05)。與缺血再灌注組相比,P

9、GE1各劑量預(yù)處理組(14μg／L、42μg／L、126μg／L)心肌組織NF-κB的表達(dá)量明顯減少,分別為39.29±2.63、30.49±3.24、24.41±4.00(P<0.05)。PGE1各劑量預(yù)處理組之間兩兩比較,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 (2)缺血再灌注組心肌組織ICAM-1的表達(dá)量為50.26±7.04,與正常對(duì)照組(22.98±5.28)相比,其表達(dá)量明顯增加(P<0.05)。與缺血再灌注組相比,

10、PGE1各劑量預(yù)處理組(14μg／L、42μg／L、126μg／L)心肌組織ICAM-1的表達(dá)量明顯減少,分別為42.28±4.69、34.96±4.01、29.51±4.82(P<0.05)。PGE1各劑量預(yù)處理組之間進(jìn)行兩兩比較,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3 Western blot測(cè)定各組大鼠心肌組織中NF-κB的表達(dá)
　　 NF-κB在缺血再灌注組(0.842±0.016)的表達(dá)較正常對(duì)照組(0.2

11、78±0.015)明顯增加(P<0.05)；與缺血再灌注組相比,PGE1各劑量預(yù)處理組(14μg／L、42μg／L、126μg／L)NF-κB的表達(dá)量依次減少,分別為0.682±0.023,0.527±0.019,0.390±0.015(P<0.05)。PGE1各劑量預(yù)處理組之間兩兩比較,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1 PGE1預(yù)處理可以改善大鼠缺血再灌注心肌纖維形態(tài)學(xué)變化,有效減輕離體大鼠心肌