心肌缺血預(yù)處理和后處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：觀察缺血預(yù)處理(ischemic preconditioning，IPC)和缺血后處理(ischemic postconditioning，IPO)對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，并探討他們各自的作用機(jī)制及是否具有疊加作用；進(jìn)一步探討IPC、IP0心肌保護(hù)作用機(jī)制與蛋白激酶C0c(PKCα)之間的關(guān)系。 方法：選擇50只250-300克實(shí)驗(yàn)用S-D大鼠，隨機(jī)分成5組：NC組(空白對照組，n=10)，開胸，穿線但不阻斷

2、；IR組(缺血再灌注損傷組，n=10)，阻斷冠狀動(dòng)脈左前降支(1eR anterior descending，LAD)40分鐘，再灌注120分鐘；IPC組(缺血預(yù)處理組，n=10)，三次短暫組斷LAD(閉塞5分鐘，再灌注10分鐘，循環(huán)三次)，余同IR組；IPO組(缺血后處理組，n=10)，阻斷LAD40分鐘，再通30秒，阻斷30秒，重復(fù)三次，再灌注120分鐘；IPC+IPO組(缺血預(yù)處理+缺血后處理組，n=10)，即阻斷LAD5分鐘，再

3、灌注10分鐘，循環(huán)三次，再次阻斷LAD40分鐘，再通30秒，阻斷30秒，循環(huán)三次后再灌注120分鐘。所有動(dòng)物術(shù)前禁食、水3小時(shí)，采取全麻，氣管切開，呼吸機(jī)輔助，胸部正中切口。所有動(dòng)物第一次阻斷LAD前分別給予肝素500單位/kg，以防止血栓形成。觀測指標(biāo)：①CK-MB測定：各組于冠狀動(dòng)脈阻斷前、再灌注30分鐘、60分鐘、120分鐘分別從右心耳取血1毫升，在全自動(dòng)生化分析儀上測定CK-MB。②心肌梗死面積測定：取血畢，速取心臟，原位阻斷L

4、AD，經(jīng)主動(dòng)脈逆灌Even’s藍(lán)，分離藍(lán)染和無藍(lán)染區(qū)，無藍(lán)染區(qū)經(jīng)冷凍、切片后用TTC法染色，最后于電子天平上稱重、記錄數(shù)據(jù)。③SOD、MDA測定：再灌注120分鐘末打開腹腔，從下腔靜脈取血，分離血清，-20℃保存待測。④PKCα測定：取心肌標(biāo)本4％多聚甲醛固定，切片用免疫組化染色，計(jì)算PKCα陽性細(xì)胞數(shù)及陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比。⑤心律失常發(fā)生率：各組動(dòng)物均常規(guī)檢測心電圖，計(jì)算再灌注損傷后心律失常(室早、室速、室顫等)發(fā)生情況。⑥形態(tài)

5、學(xué)觀測指標(biāo)：再灌注末取左室心肌適量大小固定后分別行光鏡和電鏡觀察。 結(jié)果：①CK-MB測定結(jié)果表明：CK-MB基礎(chǔ)水平在各組并無差別。在再灌注30分鐘、60分鐘、120分鐘血CK-MB水平在IR組、IPC組、IPO組及IPC+IPO組均隨著時(shí)間延長而顯著升高，表明各組均存在缺血再灌注損傷。但各時(shí)間點(diǎn)IPC組、IPO組、IPC+IPO組低于IR組(P<0.01)，提示IPC、IPO和IPC+IPO均具有減輕心肌缺血再灌注損傷的作

6、用。而IPC、IPO、IPC+IPO三組之間無明顯差別。②心肌梗死面積結(jié)果表明：IPC組、IPO組和IPC+IPO組心肌梗死面積均低于IR組(P<0.05)，而IPC、IPO、IPC+IPO三組之間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③血生化指標(biāo)表明：SoD在IPC組(88.95±7.73)、IPO組(85.36±7.20)、 IPC+IP0組(84.69±11.68)，均高于IR組(65.19±7.73)，(P<0.05)。但I(xiàn)R組MDA卻明顯高于IP

7、C組、IPO組和IPC+IP0組，(P<0.05)。④PKCα測定結(jié)果表明NC組PKCα陽性率為9.29±1.16％，IR組為9.42±1.35％，IPC組為66.60±7.85％，IPO組為61.41±6.95％，IPC+IP0組為61.97±2.80％。前兩組明顯低于后三組(P<0.01)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而后三組之間無明顯差別。⑤心律失常發(fā)生率：NC組0，IR組90％，IPC組、IPO組、IPC+IPO組分別為10％、20％、20％

8、，IR組明顯高于后三組(P<0.00714)，后三組之間無明顯差異(P=1.000)。⑥形態(tài)學(xué)研究表明：HE光鏡及透射電鏡觀察IPC組、IP0組和IPC+IPO組心肌損傷程度較IR組明顯減輕：但I(xiàn)PC組、IPO組和IPC+IPO組具有相似的形態(tài)學(xué)變化。 結(jié)論：1 缺血再灌注損傷可明顯破壞心肌細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞壞死，增加心律失常發(fā)生率。2心肌缺血預(yù)處理、心肌缺血后處理及心肌缺血預(yù)處理+心肌缺血后處理均可減輕再灌注損傷，縮小梗死面積，