內(nèi)毒素預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:采用結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支法建立在體急性心肌缺血再灌注模型，與未處理組相比，觀察內(nèi)毒素預(yù)處理組大鼠心肌組織白細(xì)胞介素．1受體相關(guān)激酶．4(IRAK-4)mRNA及蛋白表達(dá)水平，NF-kEI與血清TNF-a水平變化情況，同時(shí)通過HE染色觀察內(nèi)毒素預(yù)處理對(duì)缺血再灌注心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響，探討內(nèi)毒素預(yù)處理對(duì)缺血再灌注心肌的保護(hù)作用并初步探討其相關(guān)機(jī)制。 方法:建立大鼠在體心肌缺血再灌注模型，24只大鼠隨機(jī)分為三組，每組8只：①

2、A組：假手術(shù)組(sham組)，分別于第1、2、3、4、5天經(jīng)尾緣靜脈給予等體積0.5ml無菌PBS液。第8天制作模型，僅穿線，不結(jié)扎前降支(LAD)，曠置40min，2h后取材；②B組：缺血再灌注組(I/L組，ischemia and reperfusion group)，前5天處理同A組。第8天制作模型，結(jié)扎LAD 40min，再灌注2h取材；⑨c組：內(nèi)毒素預(yù)處理組(ET組，endotoxin tolerance group)，第1天

3、經(jīng)尾緣靜脈給予內(nèi)毒素0.1mg/kg，第2、3、4、5天給予0.5mg/kg，上述均用PBS液稀釋為0.5ml，第8天制作模型，結(jié)扎LAD 40min，再灌注2h后取材。 Maclab生理記錄儀監(jiān)測心電圖變化，RT-PCR法檢測心肌組織中IRAK-4mRNA表達(dá)水平，Westerm-Blot法檢測心肌組織1RAK-4蛋白表達(dá)水平，免疫組化方法檢測心肌組織中NF-kB的表達(dá)，ELISA法檢測血清TNF-a含量，HE染色觀察各組心肌

4、形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果:1.RT-PCR結(jié)果：測定再灌注2h后心肌組織IRAK-4mRNA表達(dá)水平，結(jié)果顯示：El組和I/R組的表達(dá)水平明顯高于sham組(P<0.01)，并且ET組的表達(dá)水平又明顯低于I/R組(P<0.01),差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.Western-Blot結(jié)果：測定再灌注2h后心肌組織IRAK-4蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示：ET組和I/R組的蛋白表達(dá)水平明顯高于sham組(P<0.01)，并且ET組的表達(dá)水平又明顯低于

5、I/R組(P<0.01)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.免疫組化結(jié)果：sham組中NF-rB幾乎無表達(dá)或偶有表達(dá)；I/R組NF-kB陽性表達(dá)最高，主要表現(xiàn)為胞核和，或胞漿黃染；ET組NF-kb陽性表達(dá)較I/R組為低。對(duì)結(jié)果進(jìn)行灰度分析，三組陽性表達(dá)率(灰度值)差別明顯，兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。4.ELISA檢測結(jié)果：灌注結(jié)束后取血清測TNF-a含量，與sham組相比，I/R組和El組TNF-a含量明顯升高(P<0.01)；而經(jīng)內(nèi)

6、毒素預(yù)處理后，ET組TNF-a含量明顯低于I/R組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。5.光鏡觀察：HE染色光鏡下觀察，sham組心肌細(xì)胞排列整齊，著色均勻，無明顯變性、壞死等改變；I/R組心肌細(xì)胞排列紊亂，著色不均，部分區(qū)域心肌纖維斷裂；ET組細(xì)胞排列紊亂程度較輕，著色相對(duì)均勻，水腫變性較輕。 結(jié)論:1.心肌缺血再灌注后IRAK-4、N-kB及TNF-a表達(dá)增強(qiáng)。2.抑制IRAK-4的表達(dá)，進(jìn)而抑制NF-kB、TNF-a可能是