饑餓對(duì)大鼠心肌自噬影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:饑餓是食物供應(yīng)或攝入受到限制而使機(jī)體處于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和能量攝入不足或缺乏的狀態(tài)。自噬是在真核細(xì)胞內(nèi)普遍存在的重要生物學(xué)現(xiàn)象，廣泛參與多種生理病理過(guò)程，其主要作用之一是降解細(xì)胞自身物質(zhì)并利用降解產(chǎn)物提供能量和重建細(xì)胞結(jié)構(gòu)、維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)。本研究擬探討?zhàn)囸I對(duì)大鼠心肌自噬的影響，為整體水平的自噬研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和參考。
　　方法:健康雄性SPF級(jí)SD大鼠105只，3月齡，體重330～370g，采用隨機(jī)數(shù)字表法，分為2組：正常對(duì)照組（C組

2、，n＝15）和饑餓模型組（S組，n＝90）；其中，S組根據(jù)饑餓時(shí)間又隨機(jī)分為六個(gè)亞組（n＝15），饑餓1d組（S1亞組）、饑餓2d組（S2亞組）、饑餓3d組（S3亞組）、饑餓5d組（S5亞組）、饑餓7d組（S7亞組）和饑餓9d組（S9亞組）。饑餓期間無(wú)飼料供應(yīng)，自由攝水。饑餓處理后，采用2％多聚甲醛-2.5%戊二醛磷酸鹽緩沖液固定心肌組織，行透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)；采用4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液固定心肌組織，制作石蠟切片，行蘇木素-伊紅染色

3、觀察心肌組織病理學(xué)改變。采用免疫組織化學(xué)染色與Western blot法檢測(cè)大鼠心肌組織LC3與Beclin1的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.HE染色觀測(cè)結(jié)果：C組大鼠心肌組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常；與C組比較，S組心肌組織呈不同程度的損傷，隨著饑餓時(shí)間的延長(zhǎng)，病理改變加重。
　　2.透射電子顯微鏡觀測(cè)結(jié)果：C組心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)正常；S組可見(jiàn)線粒體呈不同程度的損傷，隨著饑餓時(shí)間的延長(zhǎng)，病理改變加重，可見(jiàn)分隔膜與自噬體結(jié)構(gòu)。

4、r>　　3.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：與C組比較，S組各亞組大鼠心肌組織LC3與Beclin1表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。S組各亞組間兩兩比較，LC3與Beclin1表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），且在S1亞組和S2亞組，LC3與Beclin1表達(dá)持續(xù)增高，于S2亞組達(dá)到峰值后表達(dá)逐漸下降，在S7、S9亞組，LC3與Beclin1表達(dá)再次升高。
　　4.Western blot檢測(cè)結(jié)

5、果：與C組比較，S組各亞組大鼠心肌組織LC3與Beclin1表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。S組各亞組間兩兩比較，LC3與Beclin1表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），且在S1亞組和S2亞組，LC3與Beclin1表達(dá)持續(xù)增高，于S2亞組達(dá)到峰值后表達(dá)逐漸下降，在S7、S9亞組，LC3與Beclin1表達(dá)再次升高。
　　結(jié)論:饑餓狀態(tài)下大鼠心肌組織LC3與Beclin1表達(dá)上調(diào)，短期