饑餓時(shí)相對(duì)大鼠大腦皮質(zhì)自噬的影響.pdf

1、目的:饑餓條件下機(jī)體處于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和能量攝入不足或缺乏的狀態(tài)，自噬是一個(gè)基本的生物學(xué)過程，其基本功能之一是使細(xì)胞在饑餓和其他形式的脅迫期間能夠消化其自身的胞質(zhì)成分而維持細(xì)胞的存活。機(jī)體對(duì)饑餓狀態(tài)代謝反應(yīng)的整體調(diào)節(jié)是復(fù)雜變化的，且自噬本身也是一個(gè)隨時(shí)間連續(xù)變化的動(dòng)態(tài)過程。腦作為神經(jīng)中樞，其由饑餓引起的應(yīng)激反應(yīng)具有特殊性。本研究擬經(jīng)自噬體的角度，探討?zhàn)囸I時(shí)相對(duì)大鼠大腦皮質(zhì)自噬的影響。
　　方法:健康雄性SPF級(jí)SD大鼠105只，3月齡，

2、體重330～370g，采用分層隨機(jī)化法分為3組：正常對(duì)照組（C組，n＝15）、短期饑餓組（SS組，n＝45）和長(zhǎng)期饑餓組（LS組，n＝45）；SS組隨機(jī)分為饑餓1d（S1亞組）、2d（S2亞組）、3d（S3亞組）三個(gè)亞組（n＝15），LS組隨機(jī)分為饑餓5d（S5亞組）、7d（S7亞組）、9d（S9亞組）三個(gè)亞組（n＝15）。饑餓期間大鼠無飼料供應(yīng)，自由飲水。各組饑餓處理結(jié)束后，采用蘇木素-伊紅（HE）染色觀察腦組織病理學(xué)改變，采用透射電

3、子顯微鏡觀察腦組織超微結(jié)構(gòu)，采用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)自噬相關(guān)基因LC3與Beclin1的表達(dá)，采用Western blot法測(cè)定大鼠大腦皮質(zhì)LC3與Beclin1的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.HE染色觀測(cè)結(jié)果：C組大鼠腦組織結(jié)構(gòu)完整；與C組比較，SS組腦組織病理學(xué)改變不明顯；LS組可見部分神經(jīng)元形態(tài)發(fā)生改變，且隨著饑餓時(shí)間的延長(zhǎng)，病理改變加重。
　　2.透射電子顯微鏡觀測(cè)結(jié)果：C組神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)完整；SS組可見部分

4、線粒體輕度腫脹；LS組可見毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，基膜破損，線粒體呈現(xiàn)不同程度的損傷，可見包裹細(xì)胞器的自噬體。
　　3.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：與C組比較，SS組的S1和S2亞組大鼠大腦皮質(zhì)LC3與Beclin1表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），S3亞組LC3與Beclin1表達(dá)上調(diào)（P＜0.05），LS組LC3與Beclin1表達(dá)上調(diào)（P＜0.01）；與SS組比較，LS組大鼠大腦皮質(zhì)LC3與Beclin1表達(dá)上調(diào)（P＜0.01）

5、。各亞組間，S1和S2亞組比較大鼠大腦皮質(zhì)LC3與Beclin1表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與S1和S2亞組比較，S3亞組LC3與Beclin1表達(dá)上調(diào)（P＜0.05）；S3、S5、S7亞組LC3與Beclin1表達(dá)逐漸上調(diào)（P＜0.01）；與S7亞組比較，S9亞組LC3表達(dá)上調(diào)（P＜0.01），而Beclin1表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　4.Western blot檢測(cè)結(jié)果：與C組比較，SS組的S1和S

6、2亞組大鼠大腦皮質(zhì)LC3-Ⅱ與Beclin1表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），S3亞組LC3-Ⅱ與Beclin1表達(dá)上調(diào)（P＜0.01），LS組LC3-Ⅱ與Beclin1表達(dá)上調(diào)（P＜0.01）；與SS組比較，LS組大鼠大腦皮質(zhì)LC3-Ⅱ與Beclin1表達(dá)上調(diào)（P＜0.01）。各亞組間，S1和S2亞組比較大鼠大腦皮質(zhì)LC3-Ⅱ與Beclin1表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與S1和S2亞組比較，S3亞組LC3-Ⅱ與Becli