鎘致大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元凋亡的線粒體途徑.pdf

1、為探討鎘致大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元凋亡的線粒體途徑及Ca2+超載對線粒體途徑的影響，本研究采用妊娠18-19 d的SD大鼠胎鼠建立大腦皮質(zhì)神經(jīng)元模型。在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加不同濃度的醋酸鎘（0、5、10、20μmol/L），100μmol/L的caspase廣譜抑制劑Z-VAD-fmk或10μmol/L細(xì)胞內(nèi)Ca2+螯合劑BAPTA-AM，使其單獨(dú)或聯(lián)合作用于細(xì)胞，利用透射電鏡觀察鎘對線粒體超微結(jié)構(gòu)的影響;免疫印跡檢測細(xì)胞內(nèi)cleaved-cas

2、pase-3、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP、Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)量，MTT法測定細(xì)胞存活率，hoechst33258染色，熒光顯微鏡觀察細(xì)胞核形態(tài)變化。
　　結(jié)果表明:①鎘暴露引起線粒體出現(xiàn)腫脹甚至空泡化，線粒體嵴減少甚至消失等形態(tài)變化，且呈現(xiàn)一定的劑量-效應(yīng)、時間-效應(yīng)關(guān)系;②鎘可引起細(xì)胞內(nèi)cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP、Ba

3、x蛋白表達(dá)量上升，Bcl-2蛋白表達(dá)量下降。Z-VAD-fmk和BAPTA-AM能抑制細(xì)胞內(nèi)cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP蛋白表達(dá);③鎘暴露可使細(xì)胞存活率降低，呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)、時間-效應(yīng)關(guān)系。Z-VAD-fmk聯(lián)合作用組和BAPTA-AM聯(lián)合作用組與相應(yīng)染毒組比較，細(xì)胞存活率呈現(xiàn)上升趨勢;④鎘暴露引起細(xì)胞核形態(tài)的變化，出現(xiàn)核皺縮、染色質(zhì)致密濃染、核碎裂等典型的凋亡特征，這

4、種變化呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系。Z-VAD-fmk和BAPTA-AM聯(lián)合作用組相比于單獨(dú)染毒組細(xì)胞核形態(tài)變化減少。
　　結(jié)論:①不同濃度鎘暴露可降低神經(jīng)元存活率，引起細(xì)胞核與線粒體形態(tài)變化;②不同濃度和不同時間鎘暴露可激活caspase-3、caspase-9、PARP，調(diào)節(jié)Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)。③Z-VAD-fmk可緩解鎘引起的細(xì)胞存活率下降、細(xì)胞核形態(tài)變化和細(xì)胞內(nèi)cleaved-caspase-3、cleaved-caspas